兔抗USP7亲和纯化抗体--精准识别去泛素化酶，p53稳定性研究核心工具

一、产品基本规格

项目 | 规格

靶标| USP7（泛素特异性肽酶7）

验证反应种属| 小鼠、人

适用应用| IHC（免疫组织化学）、IP（免疫沉淀）、WB（蛋白质印迹）

宿主| 兔

克隆性| 多克隆

抗体形式| 完整IgG

免疫原| 人USP7蛋白第1至50位氨基酸区域

同种型| IgG

标记类型| 未偶联（Unconjugated）

纯度| 抗原亲和纯化

抗原种属来源| 人

工作浓度| 1000 ug/ml

储存条件| 2 - 8 °C

有效期| 自收货之日起1年

缓冲体系| Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7~8，含0.09%叠氮化钠

二、产品制备与质量控制

本抗体由艾美捷代理Bethyl推出，货号：A300-033A，采用抗原亲和纯化工艺制备，具体流程与质控参数如下：

亲和纯化：使用固相载体上固定的USP7特异性表位肽段进行亲和层析，确保高特异性识别USP7蛋白。

表位定位：识别表位对应于人泛素特异性肽酶7（USP7）第1至50位氨基酸之间的N端区域，参考序列编号NP_003461.1（GeneID 7874）。

浓度测定：免疫球蛋白浓度通过比尔定律（Beer's Law）确定，以1 mg/mL IgG在A280波长下吸光度为1.4作为换算基准。

三、靶标生物学信息

泛素（Ubiquitin, Ub）是真核生物中高度保守的蛋白质，其与底物蛋白的共价连接是调控蛋白质活性的重要手段——被泛素标记的蛋白质通常被靶向蛋白酶体降解。去泛素化酶（Deubiquitinating enzymes, DUBs）能够移除底物上的泛素标签，从而将蛋白质从降解途径中“挽救”回来。

USP7（又称HAUSP）是泛素特异性加工蛋白酶（UBP）家族成员之一，是该家族中研究最为深入的成员之一。其最经典的功能是与肿瘤抑制蛋白p53相互作用并使其稳定：USP7通过去泛素化p53，拮抗MDM2介导的p53泛素化降解，从而在DNA损伤应答、细胞周期调控及细胞凋亡中发挥关键作用。此外，USP7还参与调控多种其他底物蛋白的稳定性，包括PTEN、FOXO4、DNMT1等，涉及表观遗传调控、免疫应答及神经发育等多个生物学过程。

四、推荐实验条件与操作要点

以下为各应用场景的推荐稀释比例及关键操作参数，供实验设计参考。

1. 免疫组织化学（IHC）

推荐稀释比：1:1,000 ~ 1:5,000

抗原修复：推荐使用pH 6.0柠檬酸盐缓冲液进行热诱导抗原修复（HIER），适用于福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片。

适用范围：组织切片中USP7蛋白的原位检测，适用于USP7在肿瘤及正常组织中表达分布的分析。

2. 免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ug抗体/毫克蛋白裂解液

适用范围：细胞裂解液中USP7蛋白的富集，适用于去泛素化酶复合物组分分析或下游WB检测。

操作建议：建议使用Protein A琼脂糖珠进行免疫复合物捕获；沉淀前建议进行预清除（Pre-clearing）步骤以降低非特异性结合。

3. 蛋白质印迹（WB）

推荐稀释比：1:10,000 ~ 1:25,000

封闭与稀释液：5% Milk-TBST（含Tween-20的TBS缓冲液）

一抗孵育：推荐4°C孵育过夜（O/N），以确保低丰度信号的有效检测。

二抗选择：

-细胞裂解液WB：推荐使用山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（如A120-101P）进行信号放大。

-免疫沉淀物WB：推荐使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（Cat. No. S100-020），以有效降低重链交叉反应的干扰。

适用范围：细胞裂解液或IP富集产物中USP7蛋白表达水平的定量及迁移行为分析。USP7预测分子量约为128 kDa。

4. 通用操作注意事项

样本制备：推荐使用含蛋白酶抑制剂和去泛素化酶抑制剂（如N-乙基马来酰亚胺，NEM）的裂解液制备细胞裂解物，以防止USP7底物在样本制备过程中发生去泛素化。

阳性对照：推荐使用HeLa、293T等表达USP7水平较高的细胞系裂解液作为阳性对照。

叠氮化物注意事项：缓冲液含0.09%叠氮化钠作为防腐剂，若后续IP洗脱或WB检测体系涉及HRP偶联二抗，需注意叠氮化物对HRP活性的抑制作用。

五、储存与稳定性

储存条件：2 ~ 8°C冷藏保存，严禁冷冻。

有效期：自收货之日起1年内保持稳定。

分装建议：如需长期使用，建议按单次用量分装后储存于2 ~ 8°C，避免反复取用导致污染或活性下降。