兔抗KAP-1抗体亲和纯化，高纯度低背景，实验结果可重复

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的KAP-1（KRAB相关蛋白1）抗体（货号：A300-274A）是一款针对人源KAP-1蛋白的兔多克隆抗体，经抗原亲和纯化制备，适用于多种免疫检测应用。该抗体以全IgG形式提供，未偶联标记，浓度为1000 ?g/ml，缓冲体系为Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液（pH 7-8），含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。

二、靶点信息

2.1 靶点背景

KAP-1，亦称TRIM28或转录中介因子1-beta，属于三联基序RBCC/Trim结构域家族蛋白，包含RING指结构域、B盒及α螺旋卷曲螺旋区。KAP-1作为共抑制因子，通过与KRAB锌指转录抑制因子的KRAB结构域相互作用，同时作为染色质重塑复合物的支架参与转录抑制调控。

2.2 别名

TRIM28、KAP1、KRIP-1、RNF96、TIF1B、TIF1-beta、PPP1R157、E3 SUMO-protein ligase TRIM28、RING-type E3 ubiquitin transferase TIF1-beta

三、产品规格参数

参数 规格

反应性 小鼠、人

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 全IgG

免疫原 人TRIM28蛋白第1-50位残基

同型 IgG

偶联物 未偶联

纯度 抗原亲和纯化

浓度 1000 ?g/ml

储存温度 2-8°C

有效期 收货后1年

四、生产工艺与质量控制

4.1 免疫原设计

抗体识别的表位定位于人TRIM28蛋白第1至50位残基区域（参考序列NP_005753.1，GeneID 10155）。

4.2 纯化流程

采用固相载体固定的KAP-1表位特异性抗原进行亲和纯化。抗体浓度通过比尔定律测定，设定1 mg/ml IgG在280 nm波长的吸光度为1.4。

五、应用方法与推荐稀释度

5.1 免疫印迹（WB）

推荐稀释度：1:2,000 - 1:10,000

实验条件：

封闭及抗体稀释液：5% Milk-TBST

一抗孵育：过夜

细胞裂解液WB检测：使用山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（A120-101P）

免疫沉淀物WB检测：使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（S100-020）

5.2 免疫沉淀（IP）

用量：6 ?g/mg裂解物

5.3 免疫细胞化学（ICC）

推荐稀释度：1:500 - 1:2,500

推荐条件：

固定：甲醛固定

透化：对于甲醛固定细胞，推荐使用Triton-X 100进行透化处理

5.4 免疫组织化学（IHC）

推荐稀释度：1:1,000 - 1:5,000

推荐条件：

FFPE组织切片：推荐使用pH 6.0柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复

六、储存与稳定性

储存条件：2-8°C，避免冷冻

缓冲体系：Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠

运输与接收：收货后按指定条件储存，有效期一年

七、应用注意事项

1. 稀释度优化：建议初次使用时在推荐稀释度范围内进行梯度试验，以获得最佳信噪比

2. 叠氮化物影响：缓冲液中含叠氮化钠，若计划进行细胞活性实验或体内应用，需通过透析或脱盐去除

3. 多克隆抗体特性：不同批次间可能存在差异，建议对大批量实验进行批号一致性验证

4. 交叉反应性：经验证对小鼠和人源样本有反应性，其他种属需自行验证

八、典型实验流程参考

8.1 Western Blot快速流程

1. 制备蛋白样本并进行SDS-PAGE分离

2. 转膜至PVDF或硝酸纤维素膜

3. 5% Milk-TBST室温封闭1小时

4. 一抗（1:2,000-1:10,000）4°C孵育过夜

5. TBST洗涤3次，每次10分钟

6. HRP标记二抗室温孵育1小时

7. TBST洗涤后ECL显色检测

8.2 免疫沉淀流程

1. 制备细胞裂解物（每mg裂解蛋白使用6 ?g抗体）

2. 抗体与裂解物4°C孵育2小时至过夜

3. 加入Protein A/G琼脂糖珠，4°C孵育2小时

4. 洗涤沉淀复合物3-5次

5. 加入上样缓冲液煮沸变性，进行WB分析

九、相关产品推荐

山羊抗兔IgG（H+L） A120-101P WB检测

抗兔IgG轻链HRP偶联物 - IP-WB检测（避免重链干扰）

正常猪血清 S100-020 封闭缓冲液添加

*本技术参数基于产品说明书编制，具体实验条件请结合实验室实际情况进行优化。