兔抗Lasu1/Ureb1抗体亲和纯化，低非特异性结合，降低实验背景干扰

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品为兔源抗Lasu1/Ureb1（HUWE1）多克隆抗体（货号：A300-486A），经抗原亲和纯化制备，以未标记的完整IgG形式提供。该抗体特异性识别人类HUWE1蛋白（一种HECT结构域E3泛素连接酶），适用于免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白质印迹（WB）应用，是研究组蛋白修饰、细胞周期调控、凋亡及精子发生中泛素化降解机制的重要工具。

二、核心产品参数

参数项目 | 具体规格

靶标蛋白 | Lasu1 / Ureb1（HUWE1）

反应种属 | 人

宿主来源 | 兔

克隆类型 | 多克隆

抗体形式 | 完整IgG

免疫原区域 | 第2275–2325位氨基酸

抗体亚型 | IgG

标记类型 | 未标记

纯化方式 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

工作浓度 | 1000 ?g/ml（1 mg/ml）

保存温度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收货之日起1年

缓冲体系 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

三、推荐应用与实验条件

3.1 应用稀释度汇总

应用技术 | 推荐用量/稀释度 | 备注

免疫组织化学（IHC） | 1:1000 - 1:5000 | 福尔马林固定石蜡包埋切片推荐使用柠檬酸缓冲液pH 6.0进行抗原修复

免疫沉淀（IP） | 6 ?g / mg 裂解物 | 每毫克总蛋白使用6微克抗体

蛋白质印迹（WB） | 1:2000 - 1:10,000 | 推荐使用3-8% Tris-醋酸酯凝胶

3.2 蛋白质印迹（WB）专用实验条件

通用条件：

封闭液及抗体稀释液：5% 牛奶-TBST

一抗孵育方式：过夜孵育（不可缩短）

细胞裂解物Western Blot：

推荐二抗：山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）

免疫沉淀产物的Western Blot：

推荐二抗：抗兔IgG轻链HRP标记抗体

封闭液补充：需添加5%正常猪血清（货号S100-020）

*重要提示：使用轻链特异性二抗可避免免疫沉淀实验中抗体重链（约55 kDa）的交叉检测干扰。HUWE1分子量极大（约530 kDa），重链信号不直接影响目标位置，但仍建议遵循此标准以获得最佳信噪比。

3.3 免疫组织化学（IHC）特别说明

推荐使用柠檬酸缓冲液（pH 6.0）进行热诱导抗原修复

适用样本类型：福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片

建议设置阳性和阴性对照以验证特异性

四、生产与纯化工艺

4.1 亲和纯化

采用固定于固相载体上的Ureb1/Lasu1特异性表位进行亲和层析纯化，确保抗体针对目标区域具有高特异性和亲和力。

4.2 浓度测定

免疫球蛋白浓度采用比尔定律（Beer’s Law）测定，计算依据为：1 mg/ml IgG溶液在280 nm波长处的吸光度值为1.4。本产品浓度为1000 ?g/ml（1 mg/ml），属于高浓度抗体，适合需要高抗体投入量的IP实验。

五、储存与稳定性

推荐储存条件：2°C至8°C冷藏，切勿冷冻（冷冻会导致蛋白变性及抗体活性丧失）

有效期：自收货之日起1年

缓冲液成分：Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠作为防腐剂

pH范围：7–8的宽泛pH范围提供了良好的缓冲稳定性

运输建议：冷藏运输，避免反复温度波动

六、使用注意事项

1. 叠氮化钠警示：缓冲液含0.09%叠氮化钠，操作时请佩戴手套和护目镜，避免接触皮肤或吸入气溶胶。

2. 高浓度特性：本抗体浓度为1000 ?g/ml（1 mg/ml），属于高浓度制剂。进行IP实验时按6 ?g/mg裂解物用量吸取少量即可，建议使用低吸附吸头以提高移液准确性。

3. IP用量计算：推荐用量为6 ?g抗体/mg总蛋白裂解物。示例：若细胞裂解物总蛋白为2 mg，则需加入12 ?g抗体（即12 ?l）。

4. WB凝胶选择关键：HUWE1分子量极大（约530 kDa），常规SDS-PAGE系统难以有效分离。必须使用3-8% Tris-醋酸酯凝胶或类似适用于大分子量蛋白的凝胶体系。使用常规Tris-甘氨酸凝胶可能导致蛋白无法进入分离胶或迁移异常。

5. IHC抗原修复要求：对于FFPE组织切片，务必进行柠檬酸缓冲液（pH 6.0）热诱导抗原修复。省略修复步骤可能导致信号丢失或背景增高。

6. 二抗选择：

检测细胞裂解物WB时，可使用识别重链和轻链的二抗（如A120-101P）

检测IP产物WB时，建议使用抗兔IgG轻链HRP标记抗体，并添加5%正常猪血清以降低非特异性背景。

7. 过夜孵育要求：WB和IHC实验中一抗均需过夜孵育（WB为4°C，IHC为4°C或室温，建议优化）。HUWE1分子量大且丰度相对较低，过夜孵育对获得清晰信号至关重要。

8. 阳性对照推荐：建议使用HeLa、HEK293T或U2OS细胞裂解物作为WB阳性对照。IHC阳性对照可使用人睾丸组织或某些肿瘤组织切片，已知HUWE1在生殖细胞和部分癌细胞中高表达。