兔抗XRN1抗体亲和纯化，骨肉瘤标志物分析优选方案

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品为兔源抗XRN1多克隆抗体（货号：A300-443A），经抗原亲和纯化制备，以未标记的完整IgG形式提供。该抗体特异性识别人和小鼠来源的XRN1蛋白（5′→3′ 核糖核酸外切酶1），适用于免疫沉淀（IP）和蛋白质印迹（WB）应用，是研究细胞质mRNA代谢、mRNP复合物功能以及骨肉瘤肿瘤抑制机制的重要工具。

二、核心产品参数

参数项目 | 具体规格

靶标蛋白 | XRN1

反应种属 | 小鼠、人

宿主来源 | 兔

克隆类型 | 多克隆

抗体形式 | 完整IgG

免疫原区域 | 第1656位至C末端

抗体亚型 | IgG

标记类型 | 未标记

纯化方式 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

工作浓度 | 1000 ?g/ml（1 mg/ml）

保存温度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收货之日起1年

缓冲体系 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

三、推荐应用与实验条件

3.1 应用稀释度汇总

应用技术 | 推荐用量/稀释度 | 备注

免疫沉淀（IP） | 6 ?g / mg 裂解物 | 每毫克总蛋白使用6微克抗体

蛋白质印迹（WB） | 1:2000 - 1:10,000 | 建议从1:2000起始优化

3.2 蛋白质印迹（WB）专用实验条件

通用条件：

封闭液及抗体稀释液：5% 牛奶-TBST

一抗孵育方式：过夜孵育（不可缩短）

细胞裂解物Western Blot：

推荐二抗：山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）

免疫沉淀产物的Western Blot：

推荐二抗：抗兔IgG轻链HRP标记抗体

封闭液补充：需添加5%正常猪血清（货号S100-020）

*重要提示：使用轻链特异性二抗可避免免疫沉淀实验中抗体重链（约55 kDa）的交叉检测干扰。XRN1分子量约为220 kDa，与重链信号距离较远，但采用此标准仍有助于获得最佳信噪比。

四、生产与纯化工艺

4.1 亲和纯化

采用固定于固相载体上的XRN1特异性表位进行亲和层析纯化，确保抗体针对C末端区域具有高特异性和亲和力。

4.2 浓度测定

免疫球蛋白浓度采用比尔定律（Beer’s Law）测定，计算依据为：1 mg/ml IgG溶液在280 nm波长处的吸光度值为1.4。本产品浓度为1000 ?g/ml（1 mg/ml），属于高浓度抗体，适合需要高灵敏度的IP实验。

五、储存与稳定性

推荐储存条件：2°C至8°C冷藏，切勿冷冻（冷冻会导致蛋白变性及抗体活性丧失）

有效期：自收货之日起1年

缓冲液成分：Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠作为防腐剂

pH范围：7–8的宽泛pH范围提供了良好的缓冲稳定性

运输建议：冷藏运输，避免反复温度波动

别名信息：

5′-3′ exoribonuclease 1；SEP1；strand-exchange protein 1 homolog

*注释：“SEP1”源于酵母同源物链交换蛋白1的命名；“Dhm2”为小鼠同源物的名称。*

六、使用注意事项

1. 叠氮化钠警示：缓冲液含0.09%叠氮化钠，该化合物具毒性，操作时请佩戴手套和护目镜，避免接触皮肤或吸入气溶胶。

2. 高浓度特性：本抗体浓度为1000 ?g/ml（1 mg/ml），属于高浓度制剂。进行IP实验时按6 ?g/mg裂解物用量吸取少量即可，建议使用低吸附吸头以提高移液准确性。

3. IP用量计算：推荐用量为6 ?g抗体/mg总蛋白裂解物。示例：若细胞裂解物总蛋白为2 mg，则需加入12 ?g抗体（即12 ?l，因浓度为1 ?g/?l）。

4. 二抗选择：

检测细胞裂解物WB时，可使用识别重链和轻链的二抗（如A120-101P）

检测IP产物WB时，建议使用抗兔IgG轻链HRP标记抗体，并添加5%正常猪血清以降低非特异性背景。XRN1分子量较大（约220 kDa），与抗体重链（约55 kDa）无重叠，但使用轻链特异性二抗可消除潜在的降解产物干扰。

5. 过夜孵育要求：WB实验中一抗需过夜孵育（建议4°C缓慢摇动），请勿缩短至室温1–2小时。XRN1分子量大且丰度相对较低，过夜孵育对获得清晰信号至关重要。

6. 反应种属确认：本经验证可识别人和小鼠XRN1。对于大鼠等其他物种，建议通过序列比对评估交叉反应可能性，并进行预实验验证。

7. 阳性对照推荐：建议使用HeLa、HEK293T或小鼠NIH/3T3细胞裂解物作为阳性对照。XRN1在这些细胞系中普遍表达，预期在220 kDa附近检测到特异性条带。

8. 酶活性相关注意事项：XRN1是一种RNA降解酶，在制备细胞裂解物时应注意使用RNase抑制剂，以防止内源性XRN1在实验过程中降解RNA并可能影响其与其他蛋白的相互作用。

*本说明书基于产品特性研究编写，使用者应结合具体实验体系进行优化验证。