兔抗ASH2抗体亲和纯化，高浓度，IP-IHC-WB三个平台覆盖

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品为兔源抗ASH2多克隆抗体（货号：A300-107A），经抗原亲和纯化制备，以未标记的完整IgG形式提供。该抗体特异性识别人类ASH2蛋白（ASH2L，Set1样组蛋白甲基转移酶复合物亚基），适用于免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白质印迹（WB）应用，是研究组蛋白H3K4甲基化、染色质调控及表观遗传机制的重要工具。

二、核心产品参数

参数项目 | 具体规格

靶标蛋白 | ASH2（ASH2L）

反应种属 | 人

宿主来源 | 兔

克隆类型 | 多克隆

抗体形式 | 完整IgG

免疫原区域 | 第75–125位氨基酸

抗体亚型 | IgG

标记类型 | 未标记

纯化方式 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

工作浓度 | 1000 ?g/ml（1 mg/ml）

保存温度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收货之日起1年

缓冲体系 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

三、推荐应用与实验条件

3.1 应用稀释度汇总

应用技术 | 推荐用量/稀释度 | 备注

免疫组织化学（IHC） | 1:1000 - 1:5000 | 福尔马林固定石蜡包埋切片推荐使用柠檬酸缓冲液pH 6.0进行抗原修复

免疫沉淀（IP） | 6 ?g / mg 裂解物 | 每毫克总蛋白使用6微克抗体

蛋白质印迹（WB） | 1:2000 - 1:10,000

3.2 蛋白质印迹（WB）专用实验条件

通用条件：

封闭液及抗体稀释液：5% 牛奶-TBST

一抗孵育方式：过夜孵育（不可缩短）

细胞裂解物Western Blot：

推荐二抗：山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）

免疫沉淀产物的Western Blot：

推荐二抗：抗兔IgG轻链HRP标记抗体

封闭液补充：需添加5%正常猪血清（货号S100-020）

*重要提示：使用轻链特异性二抗可避免免疫沉淀实验中抗体重链（约55 kDa）的交叉检测干扰。ASH2分子量约为68 kDa，与重链信号接近，因此强烈建议在IP-WB中使用轻链特异性二抗以避免信号干扰。

3.3 免疫组织化学（IHC）特别说明

推荐使用柠檬酸缓冲液（pH 6.0）进行热诱导抗原修复

适用样本类型：福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片

稀释范围宽（1:1000–1:5000），建议从1:1000起始优化

四、储存与稳定性

推荐储存条件：2°C至8°C冷藏，切勿冷冻（冷冻会导致蛋白变性及抗体活性丧失）

有效期：自收货之日起1年

缓冲液成分：Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠作为防腐剂

pH范围：7–8的宽泛pH范围提供了良好的缓冲稳定性

运输建议：冷藏运输，避免反复温度波动

五、主要生物学功能

1. H3K4甲基化：ASH2是复合物中稳定催化亚基与WDR5/RBBP5相互作用的关键支架蛋白，直接调控H3K4甲基转移酶活性。

2. 转录激活：H3K4me3富集于活跃转录基因的启动子区，ASH2参与的甲基化事件与基因表达激活密切相关。

3. 发育调控：ASH2在胚胎发育、造血分化、神经发生等过程中发挥重要作用。

别名信息

ASH2；ash2 (absent, small, or homeotic)-like；ASH2L1；ASH2L2；ASH2-like protein；Bre2；set1/Ash2 histone methyltransferase complex subunit ASH2

六、使用注意事项

1. 叠氮化钠警示：缓冲液含0.09%叠氮化钠，操作时请佩戴手套和护目镜，避免接触皮肤或吸入气溶胶。

2. 高浓度特性：本抗体浓度为1000 ?g/ml，IP实验时按6 ?g/mg裂解物用量吸取少量即可，建议使用低吸附吸头。

3. IP用量计算：推荐用量为6 ?g抗体/mg总蛋白裂解物。示例：2 mg总蛋白加入12 ?g抗体（即12 ?l）。

4. 二抗选择关键：

细胞裂解物WB：可使用重链+轻链二抗（A120-101P）

IP产物WB：ASH2分子量约68 kDa，与兔IgG重链（约55 kDa）非常接近，常规抗兔二抗会检测到55 kDa的重链信号，严重干扰68 kDa处ASH2信号的判读。必须使用抗兔IgG轻链HRP标记抗体，并添加5%正常猪血清以彻底消除重链干扰。

5. IHC抗原修复要求：对于FFPE组织切片，务必进行柠檬酸缓冲液（pH 6.0）热诱导抗原修复。省略修复步骤可能导致信号完全丢失。

6. 过夜孵育要求：WB和IHC实验中一抗均需过夜孵育（4°C）。ASH2作为复合物亚基，过夜孵育有助于充分结合低丰度或交联的表位。

7. 阳性对照推荐：

WB：使用HeLa、HEK293T、K562细胞裂解物，预期在~68 kDa处检测到特异性条带

IHC：使用人睾丸组织或多种肿瘤组织切片，ASH2在增殖活跃的细胞核中呈阳性

七、常见应用方案建议

免疫沉淀（IP）标准流程

1. 制备细胞裂解物（使用非变性裂解缓冲液，如含150 mM NaCl的NP-40裂解液，添加蛋白酶抑制剂），测定总蛋白浓度

2. 取含1–2 mg总蛋白的裂解液，加入6 ?g抗体/mg蛋白

3. 4°C旋转孵育2小时（或过夜）

4. 加入20–30 ?l Protein A/G琼脂糖珠（50%浆液），4°C继续孵育1–2小时

5. 用裂解缓冲液洗涤琼脂糖珠3–5次

6. 加入2× SDS上样缓冲液，95°C加热5分钟洗脱

7. 进行Western Blot检测时，必须使用轻链特异性二抗

*本说明书基于产品特性研究编写，使用者应结合具体实验体系进行优化验证。