兔抗CtIP抗体亲和纯化，BRCA/pRb共调节因子分析核心试剂

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品为兔源抗CtIP多克隆抗体（货号：A300-488A），经抗原亲和纯化制备，以未标记的完整IgG形式提供。该抗体特异性识别人类CtIP蛋白（CtBP相互作用蛋白，亦称RBBP8），适用于免疫沉淀（IP）和蛋白质印迹（WB）应用，是研究DNA双链断裂修复、细胞周期调控及肿瘤抑制机制的核心工具。

二、核心产品参数

参数项目 | 具体规格

靶标蛋白 | CtIP（RBBP8）

反应种属 | 人

宿主来源 | 兔

克隆类型 | 多克隆

免疫原区域 | 第847位至C末端（897位）

抗体形式 | 完整IgG

纯化方式 | 抗原亲和纯化

工作浓度 | 1000 ?g/ml（1 mg/ml）

保存条件 | 2 - 8°C，切勿冷冻

有效期 | 1年

缓冲体系 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

三、推荐应用与实验条件

应用 | 推荐用量/稀释度 | 关键条件

免疫沉淀（IP） | 6 ?g/mg裂解物 | 每毫克总蛋白使用6 ?g抗体

蛋白质印迹（WB） | 1:2000 – 1:10,000 | 5%牛奶-TBST封闭，一抗过夜孵育

WB二抗选择：

细胞裂解物WB：使用山羊抗兔IgG重链+轻链抗体（A120-101P）

IP产物WB：必须使用抗兔IgG轻链HRP抗体，并添加5%正常猪血清（S100-020），以避免重链信号干扰（CtIP分子量约125 kDa，与55 kDa重链无重叠，但仍建议遵循标准）

四、免疫原与纯化工艺

本抗体免疫原对应人CtIP蛋白第850位至C末端（897位）之间的区域（NP_002885.1）。表位位于C末端，该区域参与CtIP与BRCA1、MRE11-RAD50-NBS1（MRN）复合物的相互作用，对DNA末端切除和同源重组修复至关重要。

采用固相载体固定的CtIP特异性表位进行亲和层析纯化，确保抗体针对C末端区域具有高特异性。免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定（1 mg/ml IgG在A280为1.4）。

五、CtIP靶标背景

CtIP（CTBP相互作用蛋白）最初鉴定为与CTBP（腺病毒E1A的C末端结合蛋白）相互作用的蛋白。后续研究发现其具有多重关键功能：

5.1 DNA损伤修复中的核心角色

CtIP是DNA双链断裂（DSB）同源重组修复（HR）的必需因子。它与MRN复合物（MRE11-RAD50-NBS1）协同启动DNA末端切除，生成3′单链DNA，从而启动HR修复。CtIP缺失导致HR缺陷，细胞对PARP抑制剂和DNA损伤化疗药物高度敏感。

5.2 肿瘤抑制功能

CtIP与两种经典肿瘤抑制因子直接相互作用：

pRb（视网膜母细胞瘤蛋白）：CtIP通过结合pRb参与细胞周期调控

BRCA1：CtIP-BRCA1相互作用是DNA损伤诱导的G2/M检查点和HR修复的关键

CtIP本身也被认为是候选肿瘤抑制因子。其表达下调或功能缺失突变在多种癌症（乳腺癌、卵巢癌、头颈部鳞癌）中被发现，导致基因组不稳定和化疗耐药。

六、使用注意事项

1. 高浓度优势：1000 ?g/ml浓缩型，IP实验仅需少量（如2 mg裂解物加12 ?l抗体），降低批次差异影响。

2. C末端特异性：抗体识别C末端区域（847–897 aa），可检测全长CtIP（约125 kDa）及部分C末端截短变体。如需检测N末端切割产物，需选用其他表位抗体。

3. IP用量精确计算：严格按照6 ?g/mg裂解物，过度增加抗体可能导致非特异性沉淀。

4. 过夜孵育要求：WB一抗必须4°C过夜孵育。CtIP丰度较低（尤其在未处理细胞中），过夜孵育是获得清晰信号的先决条件。

5. 阳性对照推荐：

WB：HeLa、U2OS、HEK293T细胞裂解物，预期在~125 kDa处检测到条带

诱导DNA损伤（如依托泊苷、电离辐射）可稳定CtIP蛋白水平

*本说明书基于产品特性编写，使用者应结合具体实验体系优化验证。