亲和纯化兔抗DDX6抗体，亲和层析精制，精准识别内源靶标

一、产品概述

DDX6（DEAD-box解旋酶6）是DEAD-box蛋白家族成员之一，该家族蛋白含有多个保守基序，其中包括高度保守的DEAD（天冬氨酸-谷氨酸-丙氨酸-天冬氨酸）氨基酸序列基序。DEAD-box蛋白的主要功能是作为ATP依赖性RNA解旋酶，在前体mRNA剪接、RNA合成、RNA降解、RNA输出、RNA翻译、RNA二级结构形成、核糖体生物发生以及核糖核蛋白（RNP）复合物组装等RNA代谢与功能的各个环节中发挥重要作用。研究表明，DDX6通过在翻译水平调控基因表达，正向调节细胞生长。

本文介绍的由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的A300-460A型兔抗DDX6多克隆抗体（货号A300-460A）由美国生产，经抗原亲和纯化，适用于小鼠及人源样本的免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB）检测。

二、核心规格参数

参数 | 详细信息

靶标 | DDX6（DEAD-box解旋酶6）

反应性 | 小鼠，人

应用 | IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 人DDX6蛋白第1–50位氨基酸（N末端）

同型 | IgG

标记 | 非偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原物种 | 人

浓度 | 200 ug/ml

储存条件 | 2 - 8 °C

保质期 | 收货后1年

缓冲液 | Tris缓冲盐水，含0.1% BSA及0.09%叠氮化钠

三、免疫原与识别表位

本抗体采用表位特异性亲和纯化工艺制备。将针对DDX6蛋白N末端区域的特异性表位固定在固相支持物上，从抗血清中亲和捕获并纯化特异性抗体。

A300-460A所识别的表位位于人DDX6蛋白第1位至第50位氨基酸（N末端区域）。编号依据Swiss-Prot数据库条目P26196（GeneID 1656）。选择N末端区域作为免疫原，可有效避免与其它DEAD-box家族成员（其保守区域主要位于中部和C末端）的交叉反应，从而提高抗体的特异性。

四、浓度测定方法

免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定。标准条件下，1 mg/mL IgG在280 nm波长处的吸光度（A280）为1.4。本抗体浓度为200 ug/ml（即0.2 mg/ml），使用时需根据实验需要计算相应体积。

五、应用与实验条件

通用说明

所有免疫印迹实验均采用5%脱脂牛奶-TBST作为封闭液及抗体稀释液。一抗孵育条件为过夜孵育（推荐4°C）。

推荐稀释比例与用量

应用 | 推荐稀释比例/用量 | 特殊说明

免疫组化（IHC） | 1:100 - 1:500 | 推荐使用Tris-EDTA缓冲液（pH 9.0）进行抗原修复（FFPE组织切片）

免疫沉淀（IP） | 6 ug/mg 裂解物 | 按抗体质量计算，体积需相应调整

免疫印迹（WB） | 1:5000 - 1:15000 | 较宽的工作范围，建议从1:5000开始优化

六、二抗选择说明

细胞裂解物免疫印迹：

使用山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）。该二抗可同时识别兔IgG的重链和轻链。

免疫沉淀产物的免疫印迹：

使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）。免疫沉淀后样本经变性处理会释放抗体的重链（约55 kDa）和轻链（约25 kDa）。采用轻链特异性二抗可有效消除重链信号的干扰，提高目标蛋白（DDX6分子量约54 kDa）的检测灵敏度。值得注意的是，DDX6的分子量（54 kDa）与抗体轻链（25 kDa）和重链（55 kDa）均有重叠，尤其是重链信号可能完全掩盖DDX6条带。因此，在检测免疫沉淀产物中的DDX6时，强烈建议使用抗兔轻链特异性二抗，以避免重链干扰。

七、产品使用与储存

储存注意事项

抗体应储存于2 - 8°C，请勿冷冻。反复冻融会导致抗体聚集和活性下降。本抗体缓冲液中含有0.1% BSA作为稳定蛋白，以及0.09%叠氮化钠作为防腐剂。

稳定性与保质期

自收货之日起，在推荐的储存条件下保质期为1年。因浓度较低（200 ug/ml），建议分装保存，避免多次开盖导致的污染和蒸发。

浓度特别提醒

与其他常见抗体（如1000 ug/ml）相比，本抗体浓度较低，使用时需注意：

免疫沉淀：推荐用量为6 ug抗体/mg裂解物。以200 ug/ml浓度计算，每mg裂解物需加入30 ul抗体。

免疫印迹：以1:5000稀释度为例，需将1 ul抗体稀释至5 ml抗体稀释液中。以1:15000稀释度计算，1 ul抗体可稀释至15 ml，经济性良好。

八、质量控制

每批次产品均经过抗原亲和纯化验证，确保抗体特异性。生产过程中使用固定于固相支持物上的DDX6 N末端特异性表位（第1-50位氨基酸）进行纯化。建议用户在使用新批次时进行稀释梯度验证（尤其是WB和IHC），以确定最佳工作浓度。因本抗体浓度较低，建议收货后立即分装为单次使用量（如5-10 ul/管），避免反复冻融及污染。

别名：

ATP依赖性RNA解旋酶p54、DEAD-box解旋酶6、DEAD-box蛋白6、HLR2、原癌基因RCK、P54