兔抗V5标签抗体亲和纯化：从低丰度到高表达的精准定量方案

一、产品概述

V5标签是一种由14个氨基酸残基组成的短肽标签，序列为GKPIPNPLLGLDST，源自猴副流感病毒5型（Simian virus 5）RNA聚合酶α亚基。作为一种表位标签，V5标签具有分子量小（约1.4 kDa）、免疫原性低、不易干扰融合蛋白天然构象和功能的优点，广泛应用于重组蛋白的检测、纯化及定位研究。与其它常用标签（如FLAG、HA、c-Myc）相比，V5标签尤其适合用于需要维持蛋白天然活性的实验体系。

本文介绍艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的兔抗V5标签抗体亲和纯化（货号：A190-120A），适用于酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫细胞化学（ICC）、免疫沉淀（IP）及免疫印迹（WB）等多种检测平台。

二、核心规格参数

参数 | 详细信息

靶标 | V5标签（GKPIPNPLLGLDST）

应用 | ELISA, ICC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

同型 | IgG

标记 | 非偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

浓度 | 1 mg/ml

储存条件 | 2 - 8 °C

保质期 | 收货后1年

缓冲液 | 磷酸盐缓冲液（PBS），含0.09%叠氮化钠

三、免疫原与生产工艺

免疫原设计

本抗体采用合成肽作为免疫原。该合成肽对应V5标签的全长氨基酸序列，即猴副流感病毒5型RNA聚合酶α亚基的第95至108位残基（序列：GKPIPNPLLGLDST）。为提高免疫原性，该合成肽与匙孔血蓝蛋白（KLH）进行化学交联偶联，随后用于兔免疫。

纯化方法

抗血清经采集后，通过亲和层析法纯化。将V5标签合成肽固定在固相支持物上，从抗血清中特异性捕获识别V5标签的抗体，经洗脱后获得高纯度、高特异性的多克隆抗体。此工艺有效去除了不识别V5标签的非特异性IgG，确保抗体在各类应用中的低背景和高信噪比。

浓度测定

免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定。标准条件下，1 mg/mL IgG在280 nm波长处的吸光度（A280）为1.4。本抗体浓度为1 mg/ml。对于酶偶联物（如HRP标记版本），酶/抗体蛋白的摩尔比为4:1（本产品为非偶联版本，此信息供参考）。

四、应用与实验条件

重要提示

并非所有列出的应用均已在本实验室经过具体测试。用户需根据自身实验体系进行优化和验证。以下推荐条件基于产品说明及行业通用经验。

通用说明

所有免疫印迹实验均采用5%脱脂牛奶-TBST作为封闭液及抗体稀释液。一抗孵育条件为过夜孵育（推荐4°C）。

推荐稀释比例与用量

应用 | 推荐稀释比例/用量 | 说明

ELISA | 1:1000 - 1:30000（检测用）；1:100 - 1:500（包板用） | 作为检测抗体时，建议从1:5000开始优化；作为包被抗体时，用PBS稀释后包被ELISA板

免疫细胞化学（ICC） | 1:100 - 1:400 | 建议使用4%多聚甲醛固定细胞，0.1% Triton X-100透化

免疫沉淀（IP） | 1 - 4 ?g/mg 裂解物 | 具体用量取决于V5标签融合蛋白的表达水平

免疫印迹（WB） | 1:1000 - 1:30000 | 建议从1:5000开始进行梯度预实验

五、二抗选择说明

细胞裂解物免疫印迹：

使用山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）。该二抗可同时识别兔IgG的重链和轻链，适用于检测总IgG信号。

免疫沉淀产物的免疫印迹：

使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）。采用轻链特异性二抗可有效避免免疫沉淀中抗体重链（约55 kDa）信号的干扰，尤其当目标融合蛋白分子量接近55 kDa时尤为重要。

六、产品使用与储存

储存注意事项

抗体应储存于2 - 8°C，请勿冷冻。反复冻融会导致抗体聚集和活性下降。缓冲液为PBS，含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。

稳定性与保质期

自收货之日起，在推荐的储存条件下保质期为1年。建议分装为单次使用量储存于2-8°C，避免反复开盖引入污染。

七、V5标签的技术优势

V5标签（14个氨基酸，GKPIPNPLLGLDST）具有以下特点，使其成为蛋白检测的优选标签：

1. 分子量极小：约1.4 kDa，远小于GFP（27 kDa）或GST（26 kDa），对融合蛋白的天然结构、互作及生物学功能干扰极小。

2. 高免疫原性：该序列在哺乳动物蛋白质组中罕见，抗V5抗体与非特异性蛋白的交叉反应风险低。

3. 多位置兼容：可融合于目标蛋白的N末端、C末端或内部环区，通常不影响蛋白的折叠和活性。

4. 检测灵敏度高：本抗体在WB中稀释比可达1:30,000，ELISA中可达1:30,000，足以检测低丰度表达的重组蛋白。