兔抗V5标签亲和纯化抗体：从低丰度检测到高表达定量

一、产品概述

由艾美捷代理Bethyl推出的兔抗V5标签亲和纯化抗体(货号：A190-120A)，经抗原亲和纯化制备，以完整IgG形式提供，未偶联任何标记物。该抗体识别V5标签（GKPIPNPLLGLDST）——源自猿猴副流感病毒5型RNA聚合酶α亚基第95至108位氨基酸残基的14肽序列。V5标签分子量小，对融合蛋白天然构象及生物学功能干扰极低，广泛用于重组蛋白表达检测与纯化。

二、核心规格参数

参数 | 详情

靶标 | V5 Tag

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG（未偶联）

纯度 | 抗原亲和纯化

浓度 | 1 mg/mL

储存条件 | 2–8 °C

有效期 | 自收货起1年

缓冲液 | PBS含0.09%叠氮钠

关键说明：浓度测定依据比尔定律（1 mg/mL IgG的A280 = 1.4）；偶联物制备时酶/抗体摩尔比为4:1，但本品为未偶联形式，该参数供后续标记参考。

三、免疫原与生产工艺

免疫原为合成肽段（序列GKPIPNPLLGLDST，对应V5标签），偶联至KLH载体蛋白后免疫家兔。抗体经固相载体（固定化该肽段）亲和层析纯化获得。此策略确保抗体特异识别V5表位，不依赖物种来源。

四、适用实验与推荐工作浓度

已验证反应性为“物种独立”，即无论目标蛋白来源于何种生物，只要携带V5标签均可识别。推荐起始稀释度如下：

ELISA：1:1,000–1:30,000（包被板用1:100–1:500）

免疫细胞化学（ICC）：1:100–1:400

免疫沉淀（IP）：1–4 ug/mg 裂解物

Western Blot（WB）：1:1,000–1:30,000

>注意：表中并非所有应用均已由实验室实际测试，首次使用建议从中值开始梯度优化。

五、Western Blot操作要点

1. 封闭与稀释液：统一使用含5%脱脂牛奶的TBST，一抗孵育过夜（4 °C推荐）。

2. 细胞裂解液WB：二抗推荐羊抗兔IgG（H+L）（货号A120-101P）。

3. 免疫沉淀后WB：为避免变性条件下IgG重链（~55 kDa）信号干扰，应使用抗兔IgG轻链HRP二抗，并在封闭液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）以降低非特异性结合。

六、储存与稳定性

储存：2–8 °C，严禁冻存（反复冻融导致活性下降）。

稳定期：1年（有效期内使用）。

防腐剂：叠氮钠（0.09%）抑制微生物生长，但后续偶联酶或细胞实验需注意透析去除。

七、应用选择快速指南

实验目的 | 推荐抗体量/稀释度 | 注意事项

检测V5融合蛋白表达 | WB 1:5,000起始 | 牛奶-TBST封闭

细胞内定位 | ICC 1:200起始 | 需固定透化

蛋白互作/复合物纯化 | IP 2 ug/mg裂解物 | 裂解液含蛋白酶抑制剂

定量检测（包被板） | ELISA 1:200包被 | 二抗需种属匹配

八、注意事项

多克隆抗体批次间可能存在效价差异，新批次建议重新滴定。

叠氮钠会抑制HRP活性，若二抗为HRP标记，需确保一抗中叠氮钠不影响后续显色（通常WB洗膜充分无影响）。

本产品仅供研究使用，不适用于诊断或治疗。

综上，该抗体凭借高特异性、宽适用性和明确的实验参数，适用于V5标签融合蛋白的检测、定位及免疫沉淀实验。使用者根据具体应用选择推荐稀释度，并严格遵循操作规范，即可获得稳定可靠的结果。