兔抗hSET1抗体亲和纯化，助力H3K4甲基化分析

一、产品概述

hSET1（人Set1同源蛋白）是Set1样组蛋白甲基转移酶（HMT）复合物的核心亚基。该复合物负责催化组蛋白H3第4位赖氨酸（H3K4）的单甲基化、二甲基化和三甲基化修饰，是表观遗传调控中激活基因转录的关键标记。Set类蛋白的名称来源于果蝇蛋白中鉴定出的SET结构域（约130-140个氨基酸）。hSET1与Ash2L、RBBP5、WDR5、hDPY-30、hSwd2、CXXC1及HCF1等多种蛋白共同组装形成Set1样复合物，在胚胎发育、细胞分化及疾病发生中发挥重要作用。

本文介绍的艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的兔抗hSET1抗体亲和纯化（货号A300-289A）由美国生产，经抗原亲和纯化，适用于小鼠及人源样本的免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB）检测。

二、核心规格参数

参数 | 详细信息

靶标 | hSET1（SETD1A，组蛋白赖氨酸N-甲基转移酶SETD1A）

反应性 | 小鼠，人

应用 | IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 人hSET1蛋白第1200–1250位氨基酸区间

同型 | IgG

标记 | 非偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原物种 | 人

浓度 | 1000 u

g/ml（1 mg/ml）

储存条件 | 2 - 8 °C

保质期 | 收货后1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠

三、免疫原与识别表位

本抗体采用表位特异性亲和纯化工艺制备。将针对hSET1蛋白的特异性表位固定在固相支持物上，从抗血清中亲和捕获并纯化特异性抗体。

A300-289A所识别的表位位于人hSET1蛋白第1200位至第1250位氨基酸之间。编号依据TrEMBL数据库条目O15047（GeneID 9739）。该区域位于hSET1蛋白的C末端部分，靠近SET结构域但不与其重叠，保证了抗体的特异性识别能力。

四、浓度测定方法

免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定。标准条件下，1 mg/mL IgG在280 nm波长处的吸光度（A280）为1.4。本抗体浓度为1000 ?g/ml（即1 mg/ml），可直接按体积量取使用。

五、应用与实验条件

通用说明

所有免疫印迹实验均采用5%脱脂牛奶-TBST作为封闭液及抗体稀释液。一抗孵育条件为过夜孵育（推荐4°C）。

推荐稀释比例与用量

应用 | 推荐稀释比例/用量 | 特殊说明

免疫组化（IHC） | 1:1000 - 1:5000 | 推荐使用pH 6.0枸橼酸盐缓冲液进行抗原修复（FFPE组织切片）

免疫沉淀（IP） | 6 ug/mg 裂解物 | 每mg细胞裂解蛋白使用6 ug抗体

免疫印迹（WB） | 1:10,000 - 1:25,000 | 超高灵敏度，建议从1:10,000开始优化

六、二抗选择说明

细胞裂解物免疫印迹：

使用山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）。该二抗可同时识别兔IgG的重链和轻链，适用于检测总IgG信号。

免疫沉淀产物的免疫印迹：

使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）。免疫沉淀后样本经变性处理会释放抗体的重链（约55 kDa）和轻链（约25 kDa）。采用轻链特异性二抗可有效降低背景干扰，提高目标蛋白（hSET1分子量约185 kDa）的检测灵敏度。添加正常猪血清可进一步封闭非特异性结合。

七、产品使用与储存

储存注意事项

抗体应储存于2 - 8°C，请勿冷冻。反复冻融会导致抗体聚集和活性下降。缓冲液中含有0.09%叠氮化钠作为防腐剂。

稳定性与保质期

自收货之日起，在推荐的储存条件下保质期为1年。建议分装为单次使用量储存于2-8°C，避免反复开盖引入污染。

八、质量控制

每批次产品均经过抗原亲和纯化验证，确保抗体特异性。生产过程中使用固定于固相支持物上的hSET1特异性表位（第1200-1250位氨基酸）进行纯化。建议用户在使用新批次时进行稀释梯度验证（尤其是WB和IHC），以确定最佳工作浓度。鉴于WB推荐稀释比高达1:25,000，该抗体具有极高的灵敏度，建议初次使用时从1:10,000开始进行梯度实验。

别名：

组蛋白赖氨酸N-甲基转移酶SETD1A、hSET1A、KMT2F、赖氨酸N-甲基转移酶2F、SET结构域包含蛋白1A、Set1、set1/Ash2组蛋白甲基转移酶复合物亚基SET1、Set1A