兔抗蓖麻毒素抗体亲和纯化，高纯度，多平台通用，支持靶向药物研究与毒检

一、产品概述

本产品为艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔抗Rictor多克隆抗体（货号：A300-459A），经抗原亲和纯化，以全IgG形式提供，未偶联标记。该抗体特异性识别Rictor蛋白（亦称mTORC2核心亚基AVO3），反应性涵盖小鼠和人源样本，适用于免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）及免疫印迹（WB）等多种应用。产品浓度为1000 ?g/ml，储存于2-8°C，有效期为收货后一年。

二、产品规格参数

参数 规格

靶点 Rictor

反应性 小鼠、人

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 全IgG

免疫原 人Rictor蛋白第1650位至C末端（第1708位）区域

同型 IgG

偶联物 未偶联

纯度 抗原亲和纯化

抗原种属 人

浓度 1000 ?g/ml

缓冲液 Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠

储存温度 2-8°C

有效期 收货后1年

三、推荐应用与实验方法

3.1 免疫印迹（Western Blot, WB）

推荐稀释度：1:2,000 - 1:10,000

标准流程：

封闭及抗体稀释液：5% Milk-TBST

一抗孵育：4°C过夜（推荐）

细胞裂解液WB检测：使用山羊抗兔IgG（重链+轻链）抗体（货号A120-101P）作为二抗

免疫沉淀物WB检测：使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）以降低重链干扰

注意事项：Rictor分子量约为192-200 kDa，建议使用6-8%的分离胶进行SDS-PAGE，并适当延长转膜时间（可选用低电压过夜转膜或湿转400 mA 2-3小时）。推荐使用PVDF膜（0.45 ?m孔径），甲醇活化后使用。

3.2 免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）

推荐用量：6 ?g/mg裂解物

3.3 免疫组织化学（Immunohistochemistry, IHC）

推荐稀释度：1:500 - 1:2,000

阳性对照：多种肿瘤组织（尤其是乳腺癌、肝癌、胶质瘤）及增殖活跃的正常组织（如扁桃体、小肠）的细胞浆中可见Rictor表达。核旁或全细胞质定位均可。

四、储存与稳定性

储存温度：2-8°C，严禁冷冻。反复冻融会导致抗体变性、聚集和效价下降。

缓冲体系：Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液（pH 7-8），含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。

有效期：收货后1年内稳定。建议分装成单次使用量（如5-10 ?l），储存于2-8°C，避免污染。

运输条件：冰袋运输。收到后请立即检查是否浑浊或沉淀。

五、使用注意事项

1. 叠氮化钠影响：缓冲液含0.09%叠氮化钠，对细胞有毒，且抑制HRP活性。若计划进行细胞培养添加实验或对IP产物进行HRP标记检测时无需去除（因为WB步骤中叠氮化物被稀释），但若需偶联HRP则必须通过透析或脱盐柱去除。

2. 多克隆抗体批次差异：不同批次间可能存在效价差异，建议对大批量实验预留批次间验证环节。本抗体为亲和纯化，差异相对较小。

3. 交叉反应性：已验证对小鼠和人Rictor有反应性。其他种属（如大鼠、猴）需自行验证。预期大小：小鼠约190 kDa，人约200 kDa。

4. Rictor表达水平：Rictor在不同组织和细胞系中表达差异较大。通常HEK293、HeLa、MEF等细胞系表达较高；某些癌细胞系可能因基因扩增或表观调控而过表达。若信号较弱，可增加上样量或浓缩IP产物。

5. 稀释度优化：推荐稀释度为一般参考范围，实际最佳稀释度需根据样本类型、实验体系和检测灵敏度进行梯度预实验确定。WB可从1:2000开始，IHC从1:500开始。

六、典型实验流程示例（WB快速方案）

准备工作：

制备Rictor表达阳性的细胞裂解液（推荐：HEK293T、HeLa、U2OS细胞）

进行BCA法蛋白定量，取50-80 ?g蛋白/孔（因Rictor分子量大且丰度中等）

步骤：

1. 蛋白样本与上样缓冲液混合，95°C变性10分钟。

2. 进行SDS-PAGE（6%分离胶，4%浓缩胶），恒压80 V进入分离胶后调至120 V直至溴酚蓝到达底部。

3. 转膜：使用PVDF膜（甲醇浸泡15秒），恒流350 mA，2小时（或4°C 30 V过夜）。

4. 封闭：5% Milk-TBST室温1小时。

5. 一抗：1:5,000稀释于5% Milk-TBST，4°C摇床孵育过夜。

6. 洗涤：TBST洗涤3次，每次10分钟。

7. 二抗：山羊抗兔HRP二抗（1:10,000）于5% Milk-TBST，室温1小时。

8. 洗涤：TBST洗涤4次，每次10分钟。

9. ECL化学发光显影，曝光观察约200 kDa条带。

预期结果：在Rictor阳性细胞裂解液中可见清晰的200 kDa条带。若进行siRNA敲低验证，该条带应显著减弱或消失。

七、相关产品推荐

产品类型 货号/名称 用途

山羊抗兔IgG（H+L） A120-101P WB二抗

抗兔IgG轻链HRP偶联物 - IP-WB检测，避免重链干扰

正常猪血清 S100-020 IP-WB封闭添加物

Rictor阳性对照裂解液（HEK293T） 自制或市售 WB/IHC阳性对照

柠檬酸盐抗原修复液（pH 6.0） - IHC修复

Protein A琼脂糖珠 - IP实验