兔抗BHC110/LSD1亲和纯化抗体，IP用量配方化，IP-WB无重链干扰

LSD1（KDM1A）是首个被发现的组蛋白去甲基化酶，特异性催化组蛋白 H3 第4位赖氨酸（H3K4）的单甲基化和二甲基化去除，在转录抑制、激活及表观遗传调控中发挥双重功能。该抗体 A300-215A 经抗原亲和纯化，靶向人 LSD1 蛋白 N 端第 50–100 位氨基酸区域，适用于染色质免疫沉淀（ChIP）、免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB）。特别地，其 WB 稀释范围高达 1:5,000–1:15,000，且 ChIP?seq 应用已有文献支持。本文从由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔抗BHC110/LSD1亲和纯化抗体（货号：A300-215A）的规格、免疫原设计、实验优化流程、功能背景及故障排查等方面提供全面技术参考。

一、产品基本规格与储存信息

参数| 内容

靶标| BHC110/LSD1（KDM1A）

反应性 | 人类

应用| ChIP、IHC、IP、WB

宿主/克隆性 | 兔 / 多克隆

形式| 完整 IgG

免疫原 | 第25至75位氨基酸之间（具体表位位于第50–100位）

亚型| IgG

标记物 | 未标记

纯度| 抗原亲和纯化

抗原种属| 人类

浓度| 1000 ?g/ml（1 mg/ml）

保存条件| 2?–?8?°C

有效期 | 自收货之日起 1 年

缓冲液 | Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液，pH 7–8，含 0.09% 叠氮化钠

关键储存提示：  

始终保存于 2–8?°C，严禁冷冻，冷冻会导致抗体聚合并丧失活性。  

叠氮化钠为防腐剂，可能抑制 HRP 活性；若用于活细胞或体内实验，需通过脱盐柱去除。  

浓度采用比尔定律标定（A280?=?1.4 对应 1?mg/mL IgG），便于精确稀释。

二、推荐应用与实验条件

免疫印迹（Western Blot, WB）

推荐稀释范围：1:5,000 – 1:15,000（极高灵敏度，经济性突出）  

封闭液与抗体稀释液：5% 脱脂牛奶 / TBST  

一抗孵育：4?°C 过夜  

二抗推荐：Goat anti?Rabbit IgG (H+L) HRP（A120-101P）  

检测方式：增强型化学发光（ECL）

WB 优化流程

1. 样本制备：  

阳性对照：HeLa、HEK293、MCF?7 等人源细胞系全裂解液。  

裂解液：RIPA（含蛋白酶抑制剂），LSD1 稳定表达，常规上样 20–30?μg。

2. 电泳：使用 8–10% SDS?PAGE（LSD1 分子量约 110?kDa）。  

3. 转印：PVDF 膜，250?mA 恒流 90 分钟。  

4. 封闭：5% 牛奶 / TBST，室温 1 小时。  

5. 一抗：用 5% 牛奶 / TBST 稀释至 1:5,000–1:15,000（首次建议 1:5,000）。  

6. 洗涤：TBST 洗涤 3×10 分钟。  

7. 二抗：HRP?山羊抗兔（1:10,000），室温 1 小时。  

8. ECL 检测。

预期结果：约 110?kDa 处单一条带。若出现多条带，可能为降解产物（常见约 55?kDa）或非特异，提高稀释度至 1:15,000 可显著改善。

免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）

用量：6?μg 抗体 / mg 总蛋白裂解液  

裂解液：非变性条件（50?mM Tris pH 7.4, 150?mM NaCl, 1% NP?40，抑制剂 cocktail）。

IP 步骤

1. 裂解细胞，取 1?mg 总蛋白。  

2. 加入 6?μg A300-215A 抗体，4?°C 旋转孵育过夜。  

3. 加入 Protein?A 磁珠，继续孵育 2 小时。  

4. 洗涤 4–5 次，洗脱（SDS 上样缓冲液，95?°C 10 分钟）。  

5. WB 检测（使用轻链特异性二抗消除重链干扰）。

注意：IP 后 WB 时，由于 LSD1 分子量 110?kDa，远高于重链（55?kDa），常规二抗也可使用；但为获得最洁净背景，推荐 抗兔 IgG 轻链 HRP 二抗 + 5% 正常猪血清（S100?020）。

免疫组织化学（Immunohistochemistry, IHC）

推荐稀释范围：1:500 – 1:2,000  

抗原修复：柠檬酸钠缓冲液（pH 6.0），高压或微波热修复 10–15 分钟。  

样本类型：福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）的人组织切片。  

封闭：5% 正常血清/BSA，室温 30 分钟。  

检测：HRP/DAB 或荧光二抗。

提示：LSD1 在多种细胞核中表达，IHC 染色应为核阳性。建议使用扁桃体或乳腺癌组织作为阳性对照。

染色质免疫沉淀（ChIP）与 ChIP?seq

用量：10?μg 抗体 / ChIP 反应（参照文献：Ram O et al., Cell 2011;147(7):1628-39）  

靶标：LSD1 占据的染色质区域（通常为转录活跃或抑制性启动子）。  

实验建议：  

使用 1–2?×?10? 细胞 / ChIP 反应。  

交联：1% 甲醛，室温 10 分钟。  

染色质剪切至 200–500?bp（超声或酶切）。  

抗体用量 10?μg，4?°C 过夜孵育。  

Protein?A/G 磁珠捕获，洗涤、洗脱、解交联，DNA 纯化后 qPCR 或测序。

文献验证：先前批次抗体已成功用于 ChIP?seq（见上述 Cell 文章），该批次经亲和纯化保留相同表位，预期性能一致。

三、该抗体的核心优势

四重应用验证：ChIP、IHC、IP、WB 全覆盖，一套抗体满足从蛋白水平到染色质水平的完整研究需求。  

极宽 WB 稀释度（1:5,000–1:15,000）：1?mg 抗体可配制 5–15?L 工作液，性价比极高。  

文献支持 ChIP?seq：引用明确，降低方法学验证风险。  

IHC 明确方案：提供柠檬酸修复条件和稀释范围，即用型参数。  

亲和纯化低背景：确保 IP 和 ChIP 特异性。  

液态稳定保存：2–8?°C 一年，无需分装冻融。