TBARS脂质过氧化检测试剂盒，可重复的MDA定量工具，助力氧化应激生物标志物研究

脂质过氧化是氧化应激导致细胞损伤的核心机制之一，广泛存在于植物与动物的多种生理及病理过程中。多不饱和脂肪酸（PUFA）在活性氧攻击下生成不稳定的脂质过氧化物，进一步分解产生一系列活性羰基化合物，其中丙二醛（MDA）是最具代表性的终产物之一。MDA可与硫代巴比妥酸（TBA）在高温酸性条件下发生可控反应，生成MDA-TBA加合物——即“硫代巴比妥酸反应物质”（TBARS）。由艾美捷代理的Cayman推出的TBARS检测试剂盒（货号：700870）提供了一套简便、可重复且标准化的检测方案，适用于血浆、血清、尿液、组织匀浆及细胞裂解液中脂质过氧化水平的定量分析。

检测原理：MDA与TBA的显色/荧光反应

在90–100°C的酸性条件下，样品中的MDA与TBA按1:2的摩尔比缩合生成粉红色的MDA-TBA复合物。该复合物具有两种检测模式：

比色法：在530–540 nm波长处读取吸光度，适用于中高浓度MDA的检测。

荧光法：采用激发波长530 nm、发射波长550 nm进行检测，灵敏度显著高于比色法，适用于低浓度样本或微量样品。

两种方法均具有良好的线性范围和重现性，研究者可根据样品浓度和可用设备灵活选择。

产品关键信息

项目 详细信息

别名 硫代巴比妥酸反应物质（TCA法）

储存温度 4°C

运输条件 美国大陆湿冰运输，其他地区可能有所不同

警告 仅限科研使用，不用于人体或兽医用途

所需但未提供的材料

请在下载试剂盒手册后确认是否需超纯水（Milli-Q或同级）及其他组分。建议实验前完整阅读说明书，准备以下常规耗材和设备：

可加热至95–100°C的水浴锅或金属浴

酶标仪（带530–540 nm滤光片）或荧光酶标仪（Ex 530 nm/Em 550 nm）

微量离心管（建议使用专用玻璃管或耐受高温的聚丙烯管）

精密移液器及无内毒素吸头

冰浴容器

正丁醇（用于萃取步骤，部分实验方案需要）

样本前处理与检测流程

1. 样品准备

血浆/血清：采血后尽快分离，避免溶血。可使用肝素或EDTA抗凝。

尿液：收集24小时尿液或随机尿，离心去除沉淀。

组织匀浆：在冷PBS或特定缓冲液中进行机械匀浆，离心取上清。建议进行蛋白定量，结果以MDA浓度/ mg蛋白表示。

细胞裂解液：收集贴壁或悬浮细胞，用RIPA或冻融法裂解，离心取上清。

> 注意：所有样品应新鲜制备或于-80°C短期保存，避免反复冻融。样品中若含有高浓度还原剂（如DTT、β-巯基乙醇）或金属螯合剂可能干扰反应。

2. 标准曲线制备

试剂盒提供MDA标准品（通常以丙二醛双二甲缩醛或TEP形式提供）。按照说明书稀释成系列浓度（例如0、1.25、2.5、5、10、25、50 ?M），与样品一同进行TBARS反应。

3. 衍生化反应

在反应管中加入样品或标准品、SDS溶液（促进脂质溶解）、TBA试剂和乙酸缓冲液（提供酸性pH）。

混匀后密封管口（防止蒸发），于95–100°C加热60分钟。

反应结束后，冰浴冷却10分钟终止反应。

（可选萃取步骤）加入正丁醇/吡啶混合液振荡萃取，离心后取有机相检测，可去除水溶性干扰物质。

4. 检测与计算

比色检测：取反应液（或萃取后有机相）200 ?L加入微孔板，在530–540 nm处读取吸光度。

荧光检测：使用激发530 nm、发射550 nm读取荧光强度。

以标准品浓度为横坐标，吸光度/荧光值为纵坐标绘制标准曲线，计算样品中MDA当量浓度。

方法优势与注意事项

优势

双检测模式：比色法适用于常规浓度范围（检测限约1–2 ?M），荧光法灵敏度提高约10倍，适合低丰度样本。

已验证样本类型：覆盖血浆、血清、尿液、组织匀浆、细胞裂解液等常见生物基质。

标准化操作：反应条件（温度、时间、pH）经过系统优化，结果在不同实验室间具有可比性。

无需特殊设备：普通酶标仪即可完成比色检测，荧光法也仅需基础荧光酶标仪。

注意事项

1. 干扰物质：高浓度葡萄糖、蔗糖、尿素及某些抗氧化剂（如维生素E）可能干扰反应。建议通过预实验评估基质效应，必要时使用标准加入法或萃取步骤去除干扰。

2. 反应温度与时间控制：严格控制95–100°C加热60分钟。温度偏低或时间缩短会导致衍生化不完全；加热时间过长可能产生非特异性副产物。

3. 试剂避光：TBA试剂对光敏感，需避光保存。整个操作过程尽量避免强光直射。

4. 标准品稳定性：MDA标准溶液应在临用前新鲜配制，避免长期存放导致降解。

5. 空白对照：每个实验必须设置试剂空白（以水替代样品），用于校正背景吸收/荧光。

数据分析与结果解释

TBARS值通常以MDA当量浓度（?M或nmol/mL）表示。对于组织或细胞样品，建议同时测定总蛋白含量，结果表示为nmol MDA/ mg蛋白或nmol MDA/ mg组织湿重。

参考范围（典型值，因物种和方法而异）：

人血清：0.5–2.5 ?M

大鼠肝匀浆：1–5 nmol/ mg蛋白

细胞裂解液：0.1–1 nmol/ mg蛋白

需要注意的是，TBARS检测反映的是MDA及其他TBA反应物的总量，并非绝对专一的MDA检测。对于要求更高特异性的研究，可结合HPLC分离或使用其他氧化应激标志物（如4-HNE、8-异前列腺素）进行验证。

应用场景

氧化应激评价：药物、毒物、环境污染物或运动/衰老等因素对机体氧化损伤的影响。

抗氧化剂筛选：体外或体内评价天然产物、合成化合物对脂质过氧化的抑制效果。

疾病生物标志物：心血管疾病、糖尿病、神经退行性疾病、肝损伤等病理状态下脂质过氧化水平的变化。

食品科学：检测油脂或食品样本的氧化酸败程度。

储存与稳定性

试剂盒整体储存于4°C，切勿冷冻。运输采用湿冰条件。开封后的试剂应按说明书要求密封避光保存，建议在6个月内使用完毕。

Cayman的TBARS检测试剂盒为脂质过氧化研究提供了一个平衡了简便性、可靠性与通量的标准化工具。无论是常规比色检测还是高灵敏度荧光检测，均可帮助研究者快速获得可重复的氧化应激定量数据，适用于基础研究、药物筛选及临床前安全性评价等多种场景。