C11 BODIPY 581/591：比例荧光法精准定量脂质氧化与铁死亡方案

细胞内的脂质过氧化是多种生理及病理过程的关键事件，尤其在铁死亡（ferroptosis）研究中，脂质活性氧的积累被视为核心标志物。C11 BODIPY 581/591（货号：27086）是由艾美捷代理的cayman推出的一种脂溶性比例荧光指示剂，专为检测脂质氧化而设计。与传统的单波长荧光探针不同，该探针在氧化前后发生明确的光谱位移，可通过比值计算排除细胞间差异、染料负载不均等干扰因素，实现对脂质过氧化水平的精准定量。

工作原理：氧化诱导的光谱漂移

C11 BODIPY 581/591 分子结构包含一个共轭双烯体系，使其在还原态（未氧化）下具有特定的激发和发射波长：最大激发波长为 581 nm，最大发射波长为 591 nm，呈现橙红色荧光。当该探针与脂质过氧化产物（如脂质氢过氧化物）发生反应后，共轭体系被破坏，激发峰漂移至 500 nm，发射峰漂移至 510 nm，转变为绿色荧光。因此，通过同时检测两种荧光信号（581/591 nm 激发下的橙红色荧光与 500/510 nm 激发下的绿色荧光），并计算两者的比值（氧化态/还原态），即可直接反映样本中的脂质过氧化水平。

核心应用：铁死亡研究的定量工具

铁死亡是一种铁依赖的程序性细胞死亡形式，以脂质过氧化物的致命性积累为特征。C11 BODIPY 581/591 已被广泛用于铁死亡的定量评估。实验中，将探针加入细胞培养体系，探针插入细胞膜脂双层；在氧化应激条件下，膜脂中的探针发生氧化，荧光从橙红色转变为绿色。通过流式细胞术、荧光显微镜或荧光酶标仪检测，可获得群体细胞或单个细胞水平的脂质氧化程度。由于采用比例检测，即使存在细胞体积差异、探针摄取不均或光漂白，也能获得稳定的定量结果。

产品关键参数

参数 详细信息

正式名称：

(T-4)-difluoro[5-[[5-[(1E,3E)-4-phenyl-1,3-butadien-1-yl]-2H-pyrrol-2-ylidene-κN]methyl]-1H-pyrrole-2-undecanoato(2-)-κN1]-borate(1-), monohydrogen

CAS号 217075-36-0

分子式 C30H34BF2N2O2 ? H

分子量 504.4

纯度 ≥95%

还原态激发/发射 581 nm / 591 nm

氧化态激发/发射 500 nm / 510 nm

性状 固体

溶解性 DMSO: 30 mg/mL；甲醇: 微溶

储存与运输条件

储存温度：-20°C

运输条件：美国大陆范围内常温运输，其他地区可能有所差异

注意事项：避免反复冻融，长期储存应分装后置于-20°C避光保存。

> 警告：本产品仅限科研使用，不用于人体或兽医用途。

使用指南（功能性建议）

1. 工作液配制

由于C11 BODIPY 581/591为脂溶性固体，建议使用无水DMSO溶解至储备液浓度（如1 mM或5 mM）。分装后-20°C避光保存，避免反复冻融。临用前用无血清培养基或PBS稀释至工作浓度（通常为1–5 μM），具体浓度需根据细胞类型和实验体系预实验优化。

2. 细胞染色步骤（以流式细胞术为例）

收集待测细胞，调整密度至约1×10? cells/mL。

加入C11 BODIPY 581/591工作液（终浓度1–5 μM），37°C避光孵育30分钟。

离心洗涤去除未结合的探针，重悬于PBS或培养基中。

如有需要，可加入死活染料（如PI或7-AAD）排除死细胞。

使用流式细胞仪检测：设置两个通道——FL1（530/30 nm，检测氧化态绿色荧光）和FL2（585/42 nm或610/20 nm，检测还原态橙红色荧光）。计算氧化态/还原态荧光比值。

阳性对照：使用已知的脂质过氧化诱导剂（如erastin、RSL3或过氧化氢叔丁醇）处理细胞；阴性对照：使用铁死亡抑制剂（如ferrostatin-1或liproxstatin-1）共同处理。

3. 荧光显微镜检测

细胞接种于共聚焦培养皿或玻底96孔板中，染色步骤同上。

使用双通道成像：还原态使用TRITC/ Cy3滤光片组（Ex 540–580 nm/ Em 590–620 nm）；氧化态使用FITC滤光片组（Ex 460–500 nm/ Em 510–540 nm）。

图像分析时，计算每个细胞或感兴趣区域的绿色/红色荧光比值，可使用ImageJ等软件进行批量处理。

4. 注意事项

探针可能发生自氧化：操作过程中尽量避光、低温，减少空气中氧气的氧化影响。

DMSO浓度控制：工作液中DMSO终浓度建议低于0.1%，以免影响细胞活性。

检测时间点选择：在铁死亡诱导后4–12小时（根据细胞类型优化）进行检测，过早可能信号较弱，过晚可能细胞大量死亡脱落。

膜电位干扰：C11 BODIPY 581/591的分布受膜电位影响较小，但极高浓度下可能出现非特异性信号，建议进行浓度梯度预实验。

产品优势总结

1. 比例检测，结果稳定：无需绝对荧光强度校准，消除了细胞数目、染料负载、光漂白等变量影响。

2. 专一性指向脂质氧化：与普通活性氧探针（如DCFH-DA）不同，直接检测脂质过氧化产物，更具病理生理相关性。

3. 铁死亡研究的“金标准”工具之一：已有大量文献支持其在铁死亡定量中的应用。

4. 多平台兼容：适用于流式细胞术、荧光显微镜、荧光酶标仪。

C11 BODIPY 581/591为脂质过氧化和铁死亡研究提供了一种灵敏、可靠、可定量的比例荧光方案，适用于药物筛选、氧化应激机制探索及细胞死亡通路分析等科研场景。