重组人HDAC6蛋白--从微管调控到PROTAC降解剂开发

产品概述

由艾美捷代理BPS Biosciences推出的重组人HDAC6（组蛋白去乙酰化酶6）（GST标签·His标签）（货号：50006），涵盖第1至1215位氨基酸（全长）。该蛋白经Sf9昆虫细胞表达系统生产，N端依次携带GST标签、6×His标签及凝血酶切割位点，经亲和纯化获得高纯度产品，具有显著的锌依赖性去乙酰化酶活性。

分子结构与设计

蛋白构建：包含人HDAC6全长（aa 1-1215），N端融合GST标签、6×His标签及凝血酶切割位点。双标签设计兼顾多种亲和纯化策略与下游检测灵活性。

分子量：约161 kDa（GST标签约26 kDa + HDAC6约135 kDa）。

表达系统：Sf9昆虫细胞，适合大分子量蛋白的全长可溶性表达，确保正确折叠与翻译后修饰。

背景与生物学意义

HDAC6是组蛋白去乙酰化酶家族中的独特成员，在结构和功能上均与其他HDACs存在显著差异。其最突出的特征包括：

胞质定位：与主要定位于细胞核的经典HDACs不同，HDAC6主要分布于细胞质中。

非组蛋白底物特异性：HDAC6的主要底物为非组蛋白，包括α-微管蛋白（调控细胞运动与迁移）、热休克蛋白HSP90（影响客户蛋白折叠）及皮层肌动蛋白（参与细胞黏附与迁移）等。

双催化结构域：HDAC6含有两个相互协作的催化结构域（CD1和CD2），其中CD2负责主要的去乙酰化活性，CD1则参与底物识别与结合。

生理与病理功能：

细胞运动调控：通过对α-微管蛋白的去乙酰化调节微管动力学，影响细胞迁移、极化及纤毛功能。

蛋白质量控制：参与错误折叠蛋白的自噬性降解，与神经元中蛋白聚集物的清除密切相关。

免疫与炎症信号：通过调控固有免疫受体的乙酰化状态，参与炎症反应的精细调节。

临床疾病关联与治疗前景：

肿瘤：HDAC6在多种恶性肿瘤中过表达或异常激活，促进肿瘤细胞迁移、侵袭及化疗耐药。

神经退行性疾病：HDAC6介导的微管运输障碍与阿尔茨海默病、帕金森病及肌萎缩侧索硬化（ALS）中轴突运输受损有关。

免疫相关疾病：HDAC6抑制剂在类风湿关节炎、系统性红斑狼疮等自身免疫疾病模型中显示出治疗效果。

目前已有多款HDAC6选择性抑制剂进入临床研究阶段，在肿瘤、神经退行性疾病及免疫疾病中展现出差异化治疗潜力。

生化特性与质量控制

纯度：经SDS-PAGE鉴定，纯度≥85%，满足体外酶学实验需求。

比活性：≥290 pmol/min/?g，采用荧光法（HDAC6 Fluorogenic Assay Kit #50076）验证，确保批次间活性一致性。

缓冲体系：含40 mM Tris-HCl（pH 8.0）、110 mM NaCl、2.2 mM KCl、0.04% Tween-20、3 mM DTT及20%甘油，兼顾酶活性保护与实验体系兼容性。

储存稳定性：-80°C条件下可稳定保存至少6个月。建议分装后液氮速冻，避免反复冻融，使用时冰上解冻并轻轻混匀，切勿涡旋振荡。

核心应用价值

本品适用于以下研究场景：

1. HDAC6抑制剂筛选：用于高通量筛选小分子化合物、多肽或PROTAC类HDAC6降解剂，测定IC??及抑制模式。相比泛HDAC抑制剂，HDAC6选择性抑制剂在安全性方面具有显著优势。

2. 酶动力学研究：测定HDAC6的Km、Vmax及kcat等参数，研究底物偏好性及催化机制。

3. 选择性谱分析：评估化合物对HDAC6与其他HDAC家族成员（如HDAC1、HDAC2、HDAC8等）的选择性差异。

4. 结构生物学研究：GST与His双标签便于多种亲和纯化策略，适用于蛋白质结晶、冷冻电镜等结构解析工作。

5. 蛋白-蛋白相互作用研究：GST标签可用于Pull-down实验，鉴定HDAC6的新型结合蛋白或调控因子。

操作注意事项

解冻与取样：冰上解冻，使用前轻轻混匀并短暂离心。

分装保存：按单次用量分装后速冻，长期保存于-80°C。

应用范围：仅供研究用途（Research Use Only），不可用于临床诊断或治疗。