重组人JNK1-β1(K55M)激酶失活蛋白，赋能蛋白-蛋白相互作用与Pull-down研究

产品概述

由艾美捷代理BPS Biosciences推出的重组人JNK1-β1（c-Jun N末端激酶1，亦称MAPK8）（GST标签）（货号：40871）激酶失活突变体，涵盖第1至384位氨基酸（全长）。该蛋白携带K55M点突变，导致激酶活性丧失，并配备N端GST标签及凝血酶切割位点。经亲和纯化获得高纯度产品，主要用作激酶测定中的底物蛋白。

分子结构与设计

蛋白构建：包含人JNK1-β1全长（aa 1-384），N端融合GST标签及凝血酶切割位点。K55M突变位于ATP结合关键残基，使该蛋白丧失磷酸转移酶活性。

分子量：约70 kDa（GST标签约26 kDa + JNK1约44 kDa）。

表达系统：E. coli原核表达系统，适用于GST融合蛋白的高水平可溶性表达与纯化。

背景与生物学意义

JNK1（c-Jun N末端激酶1）是丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族的重要成员。其活化依赖于上游激酶对其Thr183和Tyr185残基的双重磷酸化，响应于热休克、细胞因子、氧化应激等多种胞外刺激。活化后的JNK1可磷酸化并调控p53、c-Jun、ATF2等一系列下游底物，广泛参与细胞增殖、分化、凋亡及炎症应答等关键生命过程。

临床疾病关联：

肿瘤：JNK1在多种肿瘤中异常激活，参与肿瘤发生、进展和耐药。AS601245等JNK抑制剂在急性淋巴细胞白血病（ALL）的临床前研究中显示出治疗潜力。

炎症与自身免疫：JNK1信号通路在类风湿关节炎、炎症性肠病中发挥促炎作用。

神经退行性疾病：JNK1的异常激活与阿尔茨海默病、帕金森病等神经退行性病变相关。

因此，高选择性的JNK1抑制剂被认为是肿瘤、炎症及神经退行性疾病领域极具前景的治疗策略。

K55M突变体的独特价值

K55M突变位于JNK1的ATP结合口袋中赖氨酸残基（Lys55），该残基在MAPK家族中高度保守，负责与ATP的α/β磷酸基团形成关键氢键。将该残基突变为甲硫氨酸后：

激酶活性完全丧失：消除了JNK1的自磷酸化及对底物的磷酸化能力，确保本品仅作为底物发挥作用，不会干扰反应体系中其他激酶的活性读数。

构象保持完整：K55M突变不影响蛋白的整体折叠结构，保留了与上游激酶（如MKK4、MKK7）及其他相互作用蛋白的结合能力。

生化特性与质量控制

纯度：经GST亲和纯化，SDS-PAGE鉴定纯度≥90%。

活性状态：本品为激酶失活蛋白（Specific Activity: inactive），专用于底物用途。

缓冲体系：含40 mM Tris-HCl（pH 8.0）、110 mM NaCl、2.2 mM KCl、还原型谷胱甘肽、3 mM DTT及20%甘油，该配方可兼容多种激酶反应缓冲液体系。

储存稳定性：-80°C条件下可稳定保存至少6个月。建议分装后液氮速冻，避免反复冻融，使用时冰上解冻并轻轻混匀，切勿涡旋振荡。

核心应用价值

本品的核心应用场景是作为激酶活性检测中的底物蛋白，具体包括：

1. 上游激酶活性测定：用于检测MKK4、MKK7或其他未知激酶对JNK1的磷酸化能力。由于K55M突变体自身无活性，反应体系中ATP向ADP的转化量可精确反映上游激酶的活性水平。

2. 激酶抑制剂筛选：在筛选靶向JNK1上游激活通路或直接靶向底物结合位点的化合物时，本品可作为标准化底物，评估候选分子对JNK1磷酸化过程的阻断效果。

3. 蛋白-蛋白相互作用研究：GST标签便于Pull-down实验，可用于鉴定与JNK1结合的新型调控因子或支架蛋白。

4. 抗体与磷酸化位点特异性抗体制备：作为免疫原或筛选抗原，用于开发识别JNK1总蛋白或特定磷酸化状态的抗体工具。

操作注意事项

解冻与取样：冰上解冻，使用前轻轻混匀并短暂离心。

分装保存：按单次用量分装后速冻，长期保存于-80°C。

应用范围：仅供研究用途（Research Use Only），不可用于临床诊断或治疗。

参考文献

1. Derijard, B. et al., Cell. 76(6):1025-37 (1994).

2. Kolodziejczyk, S M. et al., Curr. Biol. 11(16):1278-82 (2001).