IBL-人β淀粉样蛋白毒性寡聚物检测试剂盒检测结果计算方案

淀粉样β（淀粉样β）42寡聚被认为是阿尔茨海默病（AD）的早期事件。Irie等人通过系统脯氨酸扫描和固态核磁共振研究提出了他们的假设，即淀粉样β42聚集时在22和23位具有转弯结构的淀粉样β构象具有很高的毒性，也容易形成寡聚体。1）人们认为，有毒的淀粉样贝塔构象是稳定的，很容易形成神经毒性寡聚物。该抗体（克隆：24B3）特异性检测有毒的淀粉样蛋白β构象，用于开发ELISA检测试剂盒。2）该试剂盒可以选择性地测量脑脊液中推测的淀粉样肽β低聚物。

艾美捷IBL-人β淀粉样蛋白毒性寡聚物检测试剂盒：

货号：27709-96Well

预期用途：研究用试剂

检测方法：酶联免疫吸附试验（ELISA）

标记物：辣根过氧化物酶（HRP）

适用物种：人类

检测样本类型：脑脊液（CSF）

检测范围：3.13 ~ 200 pg/mL

第一步反应条件：2 - 8 ℃ 孵育过夜

第二步反应条件：2 - 8 ℃ 孵育60分钟

灵敏度：0.27 pg/mL

化合物交叉反应性如下：

人 Aβ (1-40)：≦0.1%

人 Aβ (1-42)：≦0.1%

储存条件：2 - 8 ℃

检测服务：可提供

包装规格：96孔板 × 1

试剂盒组成：

1. 预包被板：（抗人Aβ（N）（82E1）小鼠IgG抗体）96孔 × 1  

2. 标记抗体浓缩液：（30×）HRP标记抗AβE22P 24B3小鼠IgG Fab’ 0.4 mL × 1  

3. 标准品：（E22P-Aβ40二聚体）0.5 mL × 2  

4. EIA缓冲液 30 mL × 1  

5. 标记抗体稀释液 12 mL × 1  

6. 显色底物：TMB溶液 15 mL × 1  

7. 终止液 12 mL × 1  

8. 洗涤缓冲液浓缩液 50 mL × 1  

检测原理：

本试剂盒采用固相夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。预包被板上固定有捕获抗体，样本和标准品加入孔中进行第一步反应。反应后，加入HRP标记的检测抗体进行第二步反应。洗涤去除未结合的抗体后，加入四甲基联苯胺（TMB）显色底物，显色强度与目标分子的含量成正比。

操作注意事项：

1. 样本应在采集后尽快检测。如需储存，请冷冻保存，避免反复冻融。解冻时应在低温下进行，并在检测前充分混匀。  

2. 样本应使用本试剂盒中的“4号 EIA缓冲液”进行稀释。  

3. 建议对样本和标准品进行重复检测。  

4. 每次实验都应绘制标准曲线。  

5. 样本应保持在中性pH范围内，有机溶剂的污染可能会影响检测结果。  

6. 所有试剂在使用前应恢复至室温，并轻轻充分混匀。混匀后请确认试剂质量无变化。  

7. 洗涤预包被板时，请仅使用本试剂盒提供的“8号 洗涤缓冲液浓缩液”。洗涤不充分可能导致检测失败。  

8. 若使用洗瓶，请将洗涤缓冲液注满每个孔，倒置板子并轻轻甩动，确保液体完全排出。请按说明书重复洗涤步骤，避免洗涤不彻底。  

9. 去除洗涤缓冲液后，请将板子轻叩在干净的纸巾上，确保孔内液体完全去除，注意纸巾不要接触孔内壁。  

10. “6号 显色底物（TMB溶液）”对光敏感，应避光保存，并避免与金属接触。每次使用时应按需取量，放入干净的容器中。  

11. 加入TMB溶液后，孔内液体逐渐变为蓝色。在此过程中，板子应避光保存。收集容器中剩余的TMB溶液不得倒回原瓶，以免污染。  

12. 加入“7号 终止液”后，应在30分钟内完成吸光度（O.D.）测定。

检测结果计算方法：

1. 以标准品的浓度为横轴，吸光度（O.D.）为纵轴，绘制标准曲线。可使用适当的回归曲线（如双对数转换的二次回归）拟合各点。  

2. 根据标准曲线，读取待测样本的吸光度对应的浓度值。  

3. 将读取的浓度值乘以样本的稀释倍数，计算最终浓度。