淀粉样β(淀粉样β)42寡聚被认为是阿尔茨海默病(AD)的早期事件。Irie等人通过系统脯氨酸扫描和固态核磁共振研究提出了他们的假设,即淀粉样β42聚集时在22和23位具有转弯结构的淀粉样β构象具有很高的毒性,也容易形成寡聚体。1)人们认为,有毒的淀粉样贝塔构象是稳定的,很容易形成神经毒性寡聚物。该抗体(克隆:24B3)特异性检测有毒的淀粉样蛋白β构象,用于开发ELISA检测试剂盒。2)该试剂盒可以选择性地测量脑脊液中推测的淀粉样肽β低聚物。
艾美捷IBL-人β淀粉样蛋白毒性寡聚物检测试剂盒:
货号:27709-96Well
预期用途:研究用试剂
检测方法:酶联免疫吸附试验(ELISA)
标记物:辣根过氧化物酶(HRP)
适用物种:人类
检测样本类型:脑脊液(CSF)
检测范围:3.13 ~ 200 pg/mL
第一步反应条件:2 - 8 ℃ 孵育过夜
第二步反应条件:2 - 8 ℃ 孵育60分钟
灵敏度:0.27 pg/mL
化合物交叉反应性如下:
人 Aβ (1-40):≦0.1%
人 Aβ (1-42):≦0.1%
储存条件:2 - 8 ℃
检测服务:可提供
包装规格:96孔板 × 1
试剂盒组成:
1. 预包被板:(抗人Aβ(N)(82E1)小鼠IgG抗体)96孔 × 1
2. 标记抗体浓缩液:(30×)HRP标记抗AβE22P 24B3小鼠IgG Fab’ 0.4 mL × 1
3. 标准品:(E22P-Aβ40二聚体)0.5 mL × 2
4. EIA缓冲液 30 mL × 1
5. 标记抗体稀释液 12 mL × 1
6. 显色底物:TMB溶液 15 mL × 1
7. 终止液 12 mL × 1
8. 洗涤缓冲液浓缩液 50 mL × 1
检测原理:
本试剂盒采用固相夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。预包被板上固定有捕获抗体,样本和标准品加入孔中进行第一步反应。反应后,加入HRP标记的检测抗体进行第二步反应。洗涤去除未结合的抗体后,加入四甲基联苯胺(TMB)显色底物,显色强度与目标分子的含量成正比。
操作注意事项:
1. 样本应在采集后尽快检测。如需储存,请冷冻保存,避免反复冻融。解冻时应在低温下进行,并在检测前充分混匀。
2. 样本应使用本试剂盒中的“4号 EIA缓冲液”进行稀释。
3. 建议对样本和标准品进行重复检测。
4. 每次实验都应绘制标准曲线。
5. 样本应保持在中性pH范围内,有机溶剂的污染可能会影响检测结果。
6. 所有试剂在使用前应恢复至室温,并轻轻充分混匀。混匀后请确认试剂质量无变化。
7. 洗涤预包被板时,请仅使用本试剂盒提供的“8号 洗涤缓冲液浓缩液”。洗涤不充分可能导致检测失败。
8. 若使用洗瓶,请将洗涤缓冲液注满每个孔,倒置板子并轻轻甩动,确保液体完全排出。请按说明书重复洗涤步骤,避免洗涤不彻底。
9. 去除洗涤缓冲液后,请将板子轻叩在干净的纸巾上,确保孔内液体完全去除,注意纸巾不要接触孔内壁。
10. “6号 显色底物(TMB溶液)”对光敏感,应避光保存,并避免与金属接触。每次使用时应按需取量,放入干净的容器中。
11. 加入TMB溶液后,孔内液体逐渐变为蓝色。在此过程中,板子应避光保存。收集容器中剩余的TMB溶液不得倒回原瓶,以免污染。
12. 加入“7号 终止液”后,应在30分钟内完成吸光度(O.D.)测定。
检测结果计算方法:
1. 以标准品的浓度为横轴,吸光度(O.D.)为纵轴,绘制标准曲线。可使用适当的回归曲线(如双对数转换的二次回归)拟合各点。
2. 根据标准曲线,读取待测样本的吸光度对应的浓度值。
3. 将读取的浓度值乘以样本的稀释倍数,计算最终浓度。
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