IBL-人淀粉样蛋白β寡聚体（82E1特异性）检测试剂盒检测原理&结果计算方法

研究表明，将从细胞分泌的Aβ寡聚体或从阿尔茨海默病（AD）患者大脑中提取的Aβ寡聚体注入大鼠脑内，会引发突触功能障碍和学习记忆能力的下降。此外，与健康个体相比，AD患者大脑中Aβ寡聚体的含量确实显著升高。

艾美捷IBL-人淀粉样蛋白β寡聚体（82E1特异性）检测试剂盒：

货号：27725-96Well

预期用途：研究用试剂

检测方法：酶联免疫吸附试验（ELISA）

标记物：辣根过氧化物酶（HRP）

适用物种：人类

检测样本类型：EDTA血浆、血清、脑组织提取物

检测范围：18.98 ～ 1215 pmol/L

第一步反应条件：2 - 8 ℃ 孵育60分钟

第二步反应条件：2 - 8 ℃ 孵育60分钟

灵敏度：4.41 pmol/L

化合物交叉反应性如下：

Aβ (1-16) 二聚体肽：100.0%

Aβ (1-40) 肽：0.27%

Aβ (N3pE-40) 肽：≦ 0.1%

Aβ (N3pE-42) 肽：≦ 0.1%

储存条件：2 - 8 ℃

包装规格：96孔板 × 1

试剂盒组成：

预包被板：抗人Aβ（N）（82E1）小鼠IgG单克隆抗体亲和纯化 96孔 × 1

标记抗体浓缩液（30×）：HRP标记抗人Aβ（N）（82E1）小鼠IgG单克隆抗体亲和纯化 0.1 mL × 1

标准品：人Aβ (1-16) 二聚体 0.5 mL × 2

EIA缓冲液 30 mL × 1

标记抗体稀释液 12 mL × 1

显色底物：TMB溶液 15 mL × 1

终止液 12 mL × 1

洗涤缓冲液浓缩液 50 mL × 1

初次孵育用U型板（贴有标签）96孔 × 1

检测原理：

本试剂盒采用固相夹心ELISA法。首先将样本与酶标记抗体在U型板中进行初步孵育反应，然后将该混合物转移至预包被板中进行第二步反应。洗涤去除未与包被抗体结合的成分后，使用四甲基联苯胺（TMB）作为显色底物。显色强度反映了与抗人Aβ（N）抗体（82E1）结合的分子的数量，该抗体特异性识别人类Aβ的N端，并能识别具有两个或以上表位的分子（如寡聚体、聚合物等）。检测结果以摩尔浓度表示，并以Aβ (1-16)二聚体为标准进行相对定量。

预期用途：

1、本ELISA试剂盒可检测血清、EDTA血浆和脑组织提取物中，与抗人Aβ（N）（82E1）小鼠单克隆抗体结合并具有两个或以上表位的人类Aβ分子（如寡聚体、聚合物等）。

2、由于检测结果是以Aβ二聚体为标准进行摩尔浓度计算的，因此与所检测分子的重量或数量并不直接成正比。

注意事项：

1）样本应在采集后尽快检测。如需保存，请冷冻储存，避免反复冻融。解冻时应在低温下进行，并在检测前充分混匀。

2）如有需要，请使用“4号 EIA缓冲液”对样本进行稀释。

3）建议对样本和标准品进行重复检测。

4）样本应保持在中性pH范围内。有机溶剂的污染可能会影响检测结果。

5）洗涤预包被板时，请仅使用本试剂盒提供的洗涤缓冲液。洗涤不充分可能导致检测失败。

6）洗涤后应将板轻叩在纸巾上以去除残留液体，切勿用纸巾擦拭孔壁。

7）“6号 显色底物”对光敏感，应避光保存，并避免与金属接触。

8）加入“7号 终止液”后，请在30分钟内完成检测。

检测结果计算方法：

在绘制标准曲线之前，请先从所有数据（包括标准品和待测样本）中减去空白对照的吸光度值。然后，在双对数坐标纸（log-log图）上，以标准品的浓度为横坐标，减去空白后的吸光度值为纵坐标，绘制标准品的吸光度与浓度的对应点。通过这些点绘制一条最平滑的曲线，即为标准曲线。

根据绘制的标准曲线，读取待测样本对应的浓度值。

※ 上述所示仅为典型的标准曲线示例，不能用于实际检测结果的计算。每次实验请务必自行绘制标准曲线。

文献参考：

1. Xia W, Yang T, Shankar G, Smith IM, Shen Y, Walsh DM, Selkoe DJ. A specific enzyme-linked immunosorbent assay for measuring beta-amyloid protein oligomers in human plasma and brain tissue of patients with Alzheimer disease.Arch Neurol. 2009 Feb;66(2):190-9.

2. Walsh DM, Klyubin I, Fadeeva JV, Cullen WK, Anwyl R, Wolfe MS, Rowan MJ,Selkoe DJ. Naturally secreted oligomers of amyloid beta protein potently inhibit hippocampal long-term potentiation in vivo. Nature. 2002, 4;416(6880):535-9.

3. Shankar GM, Li S, Mehta TH, Garcia-Munoz A, Shepardson NE, Smith I, Brett FM, Farrell MA, Rowan MJ, Lemere CA, Regan CM, Walsh DM, Sabatini BL,Selkoe DJ. Amyloid-beta protein dimers isolated directly from Alzheimer's brains impair synaptic plasticity and memory. Nat Med. 2008, ;14(8):837-42.