血管紧张素原(Angiotensinogen)是血管紧张素(Angiotensin)的前体蛋白,可被位于肾脏入球小管旁细胞(JG细胞)分泌的肾素(Renin)酶切割,生成血管紧张素I(Angiotensin I)。随后,血管紧张素I在血管紧张素转换酶(ACE)的作用下进一步被切割,生成血管紧张素II(Angiotensin II)。
在肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)中,血管紧张素II具有全身动脉收缩的重要作用,并能刺激肾上腺皮质分泌醛固酮(Aldosterone)。醛固酮促进体内钠的潴留,从而增加血容量、心输出量以及外周血管阻力(PVR)。当血压升高后,肾素的分泌会受到抑制。
过去,常通过检测血浆肾素活性(PRA)、活性肾素浓度(ARC)或其组合来评估RAAS中肾素的活性,但这些方法未充分考虑体位(如站立或坐位)以及一天内不同时间的变化。根据Kobori等人的研究,提出通过检测血液中完整型血管紧张素原(Intact Angiotensinogen)和总血管紧张素原(包括被肾素切割后的Des AI Angiotensinogen)的比值,可以获得更稳定的肾素活性生物标志物。
血管紧张素原的检测在原发性醛固酮增多症、新型RAAS抑制剂以及心血管和肾脏血管疾病等研究领域具有重要价值。
近年来,由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)与RAAS系统(包括ACE抑制剂和血管紧张素受体拮抗剂ARBs)之间的关系也已成为全球研究的热点。
本试剂盒可定量检测小鼠血清、血浆及细胞培养上清液中的总血管紧张素原(包括完整型血管紧张素原和被肾素切割后的Des AI血管紧张素原)。
艾美捷IBL-小鼠总血管紧张素原检测试剂盒:
货号:27103-96Well
预期用途:研究用试剂
检测方法:酶联免疫吸附试验ELISA.
标记物:辣根过氧化物酶HRP.
适用物种:小鼠
检测样本类型:血清、EDTA血浆、细胞培养上清液
※ 根据样本类型,可能需要额外添加EIA缓冲液。EIA缓冲液需另行购买,详情请参考说明书。.
检测范围:0.16 - 10 ng/mL
第一步反应条件:2 - 8 ℃ 孵育过夜
第二步反应条件:2 - 8 ℃ 孵育60分钟
灵敏度:0.03 ng/mL
特异性:可特异性检测小鼠血清、EDTA血浆和细胞培养上清液中的总血管紧张素原。
储存条件:2 - 8 ℃
包装规格:96孔板 × 1
试剂盒组成:
1. 预包被板:抗小鼠AGT135.兔IgG亲和纯化.96孔 × 1
2. 标记抗体浓缩液:30×.HRP标记抗小鼠AGT405.兔IgG Fab’亲和纯化 0.4 mL × 1
3. 标准品:重组小鼠血管紧张素原.0.5 mL × 2
4. EIA缓冲液 30 mL × 1
5. 标记抗体稀释液 12 mL × 1
6. 显色底物:TMB溶液 15 mL × 1
7. 终止液 12 mL × 1
8. 洗涤缓冲液浓缩液 50 mL × 1
检测原理:
本试剂盒采用固相夹心酶联免疫吸附法ELISA.。预包被板上固定有捕获抗体,将样本和标准品加入孔中进行第一步反应。反应后,加入HRP标记的检测抗体进行第二步反应。洗涤去除未结合的抗体后,加入四甲基联苯胺TMB.显色底物,显色强度与目标分子的含量成正比。
检测步骤:
1.加入空白对照 确定空白对照孔,每孔加入100 uL的“4号 EIA缓冲液”。
2.加入准备好的样本和标准品 每孔加入100 uL准备好的样本和标准品。
3.盖上板盖,进行孵育第一步反应。
4.洗涤 使用准备好的洗涤缓冲液洗涤板孔,并彻底去除液体。
5.加入准备好的标记抗体 每孔加入100 uL准备好的标记抗体。
6.盖上板盖,进行孵育第二步反应.。
7.洗涤 使用准备好的洗涤缓冲液彻底洗涤板孔,并完全去除液体。
8.加入“6号 显色底物 - TMB溶液” 每孔加入100 uL TMB溶液。
9.避光孵育。
10.加入“7号 终止液” 每孔加入100 uL终止液。
11.测定吸光度O.D.. 清除板底污垢或水滴,确认孔内液体表面无气泡后,以空白对照为基准,测定标准品和样本的吸光度。
测定波长:450 nm。如使用双波长测定:主波长为450 nm,副波长为600~650 nm。
检测结果计算方法:
1. 以标准品浓度为横轴,吸光度O.D..为纵轴,绘制标准曲线。可使用适当的回归曲线如双对数转换后的二次回归.拟合各点。
2. 根据标准曲线,读取待测样本的吸光度对应的浓度值。
3. 将读取的浓度值乘以样本的稀释倍数,计算最终浓度。
标准曲线示例及实测值:
备注1:
根据样本类型,可能需要额外添加EIA缓冲液。EIA缓冲液需另行购买。请务必使用本产品专用的EIA缓冲液。
备注2:**操作注意事项**
每次反应后请立即使用洗板机进行洗涤,设置等待时间为0秒。
洗涤时间越长,吸光度O.D..值可能越低。
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