IBL-小鼠总血管紧张素原检测试剂盒检测步骤和原理说明

血管紧张素原（Angiotensinogen）是血管紧张素（Angiotensin）的前体蛋白，可被位于肾脏入球小管旁细胞（JG细胞）分泌的肾素（Renin）酶切割，生成血管紧张素I（Angiotensin I）。随后，血管紧张素I在血管紧张素转换酶（ACE）的作用下进一步被切割，生成血管紧张素II（Angiotensin II）。

在肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）中，血管紧张素II具有全身动脉收缩的重要作用，并能刺激肾上腺皮质分泌醛固酮（Aldosterone）。醛固酮促进体内钠的潴留，从而增加血容量、心输出量以及外周血管阻力（PVR）。当血压升高后，肾素的分泌会受到抑制。

过去，常通过检测血浆肾素活性（PRA）、活性肾素浓度（ARC）或其组合来评估RAAS中肾素的活性，但这些方法未充分考虑体位（如站立或坐位）以及一天内不同时间的变化。根据Kobori等人的研究，提出通过检测血液中完整型血管紧张素原（Intact Angiotensinogen）和总血管紧张素原（包括被肾素切割后的Des AI Angiotensinogen）的比值，可以获得更稳定的肾素活性生物标志物。

血管紧张素原的检测在原发性醛固酮增多症、新型RAAS抑制剂以及心血管和肾脏血管疾病等研究领域具有重要价值。

近年来，由严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）引起的新型冠状病毒肺炎（COVID-19）与RAAS系统（包括ACE抑制剂和血管紧张素受体拮抗剂ARBs）之间的关系也已成为全球研究的热点。

本试剂盒可定量检测小鼠血清、血浆及细胞培养上清液中的总血管紧张素原（包括完整型血管紧张素原和被肾素切割后的Des AI血管紧张素原）。

艾美捷IBL-小鼠总血管紧张素原检测试剂盒：

货号：27103-96Well

预期用途：研究用试剂

检测方法：酶联免疫吸附试验ELISA.

标记物：辣根过氧化物酶HRP.

适用物种：小鼠

检测样本类型：血清、EDTA血浆、细胞培养上清液

※ 根据样本类型，可能需要额外添加EIA缓冲液。EIA缓冲液需另行购买，详情请参考说明书。.

检测范围：0.16 - 10 ng/mL

第一步反应条件：2 - 8 ℃ 孵育过夜

第二步反应条件：2 - 8 ℃ 孵育60分钟

灵敏度：0.03 ng/mL

特异性：可特异性检测小鼠血清、EDTA血浆和细胞培养上清液中的总血管紧张素原。

储存条件：2 - 8 ℃

包装规格：96孔板 × 1

试剂盒组成：

1. 预包被板：抗小鼠AGT135.兔IgG亲和纯化.96孔 × 1

2. 标记抗体浓缩液：30×.HRP标记抗小鼠AGT405.兔IgG Fab’亲和纯化 0.4 mL × 1

3. 标准品：重组小鼠血管紧张素原.0.5 mL × 2

4. EIA缓冲液 30 mL × 1

5. 标记抗体稀释液 12 mL × 1

6. 显色底物：TMB溶液 15 mL × 1

7. 终止液 12 mL × 1

8. 洗涤缓冲液浓缩液 50 mL × 1

检测原理：

本试剂盒采用固相夹心酶联免疫吸附法ELISA.。预包被板上固定有捕获抗体，将样本和标准品加入孔中进行第一步反应。反应后，加入HRP标记的检测抗体进行第二步反应。洗涤去除未结合的抗体后，加入四甲基联苯胺TMB.显色底物，显色强度与目标分子的含量成正比。

检测步骤：

1.加入空白对照   确定空白对照孔，每孔加入100 uL的“4号 EIA缓冲液”。

2.加入准备好的样本和标准品   每孔加入100 uL准备好的样本和标准品。

3.盖上板盖，进行孵育第一步反应。

4.洗涤   使用准备好的洗涤缓冲液洗涤板孔，并彻底去除液体。

5.加入准备好的标记抗体   每孔加入100 uL准备好的标记抗体。

6.盖上板盖，进行孵育第二步反应.。

7.洗涤   使用准备好的洗涤缓冲液彻底洗涤板孔，并完全去除液体。

8.加入“6号 显色底物 - TMB溶液”   每孔加入100 uL TMB溶液。

9.避光孵育。

10.加入“7号 终止液”   每孔加入100 uL终止液。

11.测定吸光度O.D..   清除板底污垢或水滴，确认孔内液体表面无气泡后，以空白对照为基准，测定标准品和样本的吸光度。

测定波长：450 nm。如使用双波长测定：主波长为450 nm，副波长为600～650 nm。

检测结果计算方法：

1. 以标准品浓度为横轴，吸光度O.D..为纵轴，绘制标准曲线。可使用适当的回归曲线如双对数转换后的二次回归.拟合各点。

2. 根据标准曲线，读取待测样本的吸光度对应的浓度值。

3. 将读取的浓度值乘以样本的稀释倍数，计算最终浓度。

标准曲线示例及实测值：

备注1：

根据样本类型，可能需要额外添加EIA缓冲液。EIA缓冲液需另行购买。请务必使用本产品专用的EIA缓冲液。

备注2：**操作注意事项**

每次反应后请立即使用洗板机进行洗涤，设置等待时间为0秒。

洗涤时间越长，吸光度O.D..值可能越低。