IBL-大鼠血管紧张素总原检测试剂盒丨操作手册与试剂配制方法

本试剂盒可定量检测大鼠血清和血浆样本中的总血管紧张素原（包括完整型血管紧张素原和被肾素切割后的Des AI血管紧张素原）。

艾美捷IBL-大鼠血管紧张素总原检测试剂盒：

货号：27104-96Well

预期用途：研究用试剂

检测方法：酶联免疫吸附试验（ELISA）

标记物：辣根过氧化物酶（HRP）

适用物种：大鼠

检测样本类型：血清、EDTA血浆

（※ 根据样本类型，可能需要额外添加EIA缓冲液。EIA缓冲液需另行购买，详情请参考说明书。）

检测范围：0.08 - 5 ng/mL

第一步反应条件：2 - 8 ℃ 孵育过夜

第二步反应条件：2 - 8 ℃ 孵育60分钟

灵敏度：0.009 ng/mL

特异性：可特异性检测大鼠血清和EDTA血浆中的总血管紧张素原。

储存条件：2 - 8 ℃

包装规格：96孔板 × 1

备注1：根据样本类型，可能需要额外添加EIA缓冲液。EIA缓冲液需另行购买。请务必使用本产品专用的EIA缓冲液。

备注2：**操作注意事项**

每次反应后请立即使用洗板机进行洗涤，设置等待时间为0秒。

洗涤时间越长，吸光度（O.D.）值可能越低。

试剂盒组成：

预包被板：（抗大鼠AGT（135）兔IgG亲和纯化）96孔 × 1

标记抗体浓缩液：（30×）HRP标记抗大鼠AGT（405）兔IgG Fab’亲和纯化 0.4 mL × 1

标准品：（重组大鼠血管紧张素原）0.5 mL × 2

EIA缓冲液 30 mL × 1

标记抗体稀释液 12 mL × 1

显色底物：TMB溶液 15 mL × 1

终止液 12 mL × 1

洗涤缓冲液浓缩液 50 mL × 1

检测原理：

该试剂盒为固相夹心ELISA（酶联免疫吸附试验）。当一抗被涂覆在平板上时，样品和标准品被加入到用于第一反应的孔。反应后，HRP偶联的二抗加入孔中进行第二次反应。洗干净后，解开次级将抗体四甲基联苯胺（TMB）加入孔中并显色。

操作手册与试剂配制方法：

一、需自备但试剂盒中未提供的材料

酶标仪（Plate reader）

微量移液器及吸头

稀释用试管

量筒和烧杯

去离子水

洗板机（Plate washer）

纸巾

收集容器（例如：洁净的一次性试管）

冰箱

二、准备工作

1、洗涤缓冲液的配制

将“8号 洗涤缓冲液浓缩液”用去离子水稀释40倍，作为实验用洗涤缓冲液。根据实际需要调整配制量。

2、标记抗体的配制

使用洁净的收集容器，将“2号 标记抗体浓缩液”用“5号 标记抗体稀释液”稀释30倍，混匀后备用。

3、标准品的配制

向“3号 标准品”瓶中加入0.5 mL去离子水，充分溶解。溶解后标准品浓度为10 ng/mL。

配制好的标准品可分装后冷冻保存，但不得反复冻融。

准备7支试管用于标准品稀释，每管加入230 μL的“4号 EIA缓冲液”。

将10 ng/mL的标准品取230 μL加入第一支试管（Tube-1，5 ng/mL），轻轻混匀。

然后从Tube-1中取230 μL加入第二支试管（Tube-2，2.5 ng/mL），轻轻混匀。

依此类推，进行2倍系列稀释，共配制7个浓度梯度的标准品，浓度范围从5 ng/mL至0.08 ng/mL。

标准品稀释浓度如下：

Tube-1：5 ng/mL

Tube-2：2.5 ng/mL

Tube-3：1.25 ng/mL

Tube-4：0.63 ng/mL

Tube-5：0.31 ng/mL

Tube-6：0.16 ng/mL

Tube-7：0.08 ng/mL

4、待测样本的配制

使用本试剂盒中的“4号 EIA缓冲液”对待测样本进行稀释，稀释比例如下：

大鼠血清或EDTA血浆：至少稀释2,000倍。

如需大量使用EIA缓冲液，可另行购买“大鼠血管紧张素原EIA缓冲液（100 mL，产品编号：27104D100）”。

检测结果计算方法：

1、以标准品的浓度为横轴，吸光度（O.D.）为纵轴，绘制标准曲线。可使用适当的回归曲线（如双对数转换后的二次回归）拟合各点。

2、根据标准曲线，读取待测样本的吸光度对应的浓度值。

3、将读取的浓度值乘以样本的稀释倍数，计算最终浓度。