AAT Bioquest-iFluor 488刀豆蛋白A偶联物：高灵敏度细胞标记工具

刀豆蛋白A（ConA）是一种凝集素，能特异性结合各种糖、糖蛋白和糖脂中的某些结构。Con A是一种众所周知的T细胞有丝分裂原，可以激活免疫系统，招募淋巴细胞并引发细胞因子的产生。除了其促有丝分裂活性外，ConA还可以通过线粒体介导的凋亡和自噬诱导程序性细胞死亡。ConA也被报道可以激活NFAT（活化T细胞的核因子），NFAT是一个转录因子家族，在免疫系统的发育和功能中很重要，包括T细胞受体（TCR）的参与。ConA在生物学和生物化学中被广泛用于表征各种细胞表面的糖蛋白和其他含糖实体。它还用于在凝集素亲和层析中纯化糖基化大分子，以及研究各种免疫细胞的免疫调节。ConA在B-聚糖分支结构的末端位置特异性结合α-D-甘露糖基和α-D-葡萄糖基残基（两种己糖，仅在碳2上的醇不同）。它有4个结合位点，对应于4个亚基。刀豆蛋白A（Con A）是细胞生物学中应用最广泛的凝集素之一。iFluor?488标记的刀豆球蛋白A选择性结合A-吡喃甘露糖基和A-吡喃葡萄糖基残基，并可能显示出最亮的绿色荧光。

图：活HeLa细胞用iFluor?488刀豆蛋白A偶联物以5?g/mL的浓度染色30分钟。使用FITC滤光片组通过荧光显微镜获取图像。

艾美捷AAT Bioquest-iFluor 488刀豆蛋白A偶联物：

单位大小：1 毫克

目录编号：25580

分子量：不适用

溶剂：水

校正因子（260 纳米）：0.21

校正因子（280 纳米）：0.11

消光系数（厘米 -1 M -1）：750001

激发（纳米）：491

发射（纳米）：516

量子产率：0.9

H-短语：H303, H313, H333

危害符号：XN

预期用途：仅限研究使用（RUO）

R-短语：R20, R21, R22

储存：冷冻（< -15°C）；尽量减少光照

UNSPSC：12171501

除非另有说明，所有未使用的库存溶液应在制备后分成单次使用的小份，并储存在-20°C。避免反复冻融。

iFluor? 488-刀豆蛋白A标记物库存溶液（200倍）

将500微升的ddH2O加入粉末中，制成2毫克/毫升的库存溶液。

注意     重悬后的共轭溶液可在2-8°C短期储存，或在-20°C长期储存。

工作溶液的准备

iFluor? 488-刀豆蛋白A标记物工作溶液（1倍）

将5微升的200倍共轭溶液加入1毫升HHBS缓冲液中。

注意     不同细胞系的优化染色浓度可能不同。推荐的起始浓度为活细胞5-10微克/毫升。

样品实验方案

在打开前将小瓶预热至室温并短暂离心。染色方案因应用而异。应通过实验确定共轭物的适当稀释度。

活细胞染色

用HHBS缓冲液洗细胞两次。

加入100微升iFluor? 488-刀豆蛋白A工作溶液。

在37°C下用工作溶液孵育细胞10-30分钟。

用HHBS缓冲液洗细胞两次。

使用FITC滤光片组在荧光显微镜下成像细胞。

固定细胞染色

刀豆蛋白A标记物也可用于染色固定细胞。

用4%甲醛在PBS中固定细胞。

注意     对于固定细胞膜染色，建议不进行通透化步骤。固定后的通透化步骤会导致细胞内结构如高尔基体和内质网（ER）结构染色。

加入100微升iFluor? 488-刀豆蛋白A工作溶液。

在室温下用刀豆蛋白A共轭物工作溶液孵育细胞10-30分钟。

用HHBS缓冲液洗细胞两次。

使用FITC滤光片组在荧光显微镜下成像细胞。

AAT Bioquest-iFluor 488刀豆蛋白A偶联物文献参考：

Short-term high-fat diet intake leads to exacerbation of concanavalin A-induced liver injury through the induction of procoagulation state.

Authors: Nanizawa, Eri and Tamaki, Yuki and Sono, Reika and Miyashita, Rintaro and Hayashi, Yumi and Kanbe, Ayumu and Ito, Hiroyasu and Ishikawa, Tetsuya

Journal: Biochemistry and biophysics reports (2020): 100736

Montelukast ameliorates Concanavalin A-induced autoimmune hepatitis in mice via inhibiting TNF-α/JNK signaling pathway.

Authors: El-Kashef, Dalia H and Abdelrahman, Rehab S

Journal: Toxicology and applied pharmacology (2020): 114931

Acupuncture stimulation attenuates TNF-α production via vagal modulation in the concanavalin A model of hepatitis.

Authors: Lim, Hee-Don and Kim, Ki-Joong and Jo, Byung Gon and Park, Ji-Yeun and Namgung, Uk

Journal: Acupuncture in medicine : journal of the British Medical Acupuncture Society (2020): 964528420907338

Deficiency of O-linked-glycosylation regulates activation of T cells and aggravates Concanavalin A-induced liver injury.

Authors: Hao, Xiaohua and Gao, Meixin and He, Lingling and Ye, Xiaohui and Yang, Junru and Zhang, Fuyang and Liu, Ran and Wei, Hongshan

Journal: Toxicology (2020): 152411

Nicotine attenuates concanavalin A-induced liver injury in mice by regulating the α7-nicotinic acetylcholine receptor in Kupffer cells.

Authors: Zhao, Jing and Park, Surim and Kim, Jong-Won and Qi, Jing and Zhou, Zixiong and Lim, Chae Woong and Kim, Bumseok

Journal: International immunopharmacology (2020): 106071

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