Fura-2, AM，比率法钙测量的经典探针方案

由艾美捷代理AAT Bioquest推出的Fura-2, AM（CAS 108964-32-5），货号：21020，是一种紫外激发的比率型钙离子指示剂，其核心特性在于结合钙后激发波长发生偏移，从而实现对细胞内钙浓度的定量测定，且不受染料负载量和细胞厚度的影响。这一比率法设计使其区别于以Fluo-4为代表的单波长强度型探针——后者依赖单一光谱数值，易受染料浓度差异干扰；而Fura-2通过两个波长的比值计算，有效抵消了负载不均带来的误差。

激发偏移机制：340/380 nm比值的定量基础

Fura-2结合钙后，在300–400 nm范围内表现吸收偏移：游离态染料激发峰为380 nm，钙结合态激发峰为340 nm。在510 nm发射波长下扫描激发光谱，即可测得这一变化，计算所得的340/380 nm比值与细胞内钙离子浓度成正比。其解离常数Kd为145 nM，为定量换算提供了明确参数；同时510 nm的发射波长使其可与可见光染料搭配进行多色实验。产品为细胞膜通透形式（AM酯），进入细胞后被酯酶水解为活性形式，实现活细胞内钙测量。

校准友好：Rmax/Rmin支撑绝对钙定量

Fura-2的比率法特性带来校准上的便利：通过测定Rmax（钙饱和态比值）与Rmin（无钙态比值），结合Kd值即可换算绝对钙浓度。这一校准路径使实验从"相对变化观察"升级为"绝对浓度测定"，适合需要定量比较不同处理组间钙水平的实验设计。

与同类探针的选型对比

与Indo-1相比，二者同属比率型钙指示剂但机制不同：Fura-2为激发比率型染料，吸收光谱发生偏移（340/380 nm）；Indo-1为发射比率型染料，发射光谱发生偏移（400/480 nm）。选型时需结合仪器的激发光源与滤光片配置——Fura-2适配紫外激发、510 nm发射检测，适合荧光显微镜与荧光光度计平台。此外，比率法相比单波长探针还能减轻染料泄漏与光漂白的影响，在长时间活细胞成像中更具稳定性。综合来看，Fura-2, AM以比率法定量、校准友好和抗干扰能力为核心优势，适合需要可靠定量细胞内钙信号的药理学与细胞信号研究。

示例数据分析

比率法钙测量：摆脱染料负载与细胞厚度的干扰

Fura-2, AM（CAS 108964-32-5）是一种紫外激发的比率型钙离子指示剂，其核心特性在于结合钙后激发波长发生偏移，从而实现对细胞内钙浓度的定量测定，且不受染料负载量和细胞厚度的影响。这一比率法设计使其区别于以Fluo-4为代表的单波长强度型探针——后者依赖单一光谱数值，易受染料浓度差异干扰；而Fura-2通过两个波长的比值计算，有效抵消了负载不均带来的误差。

激发偏移机制：340/380 nm比值的定量基础

Fura-2结合钙后，在300–400 nm范围内表现吸收偏移：游离态染料激发峰为380 nm，钙结合态激发峰为340 nm。在510 nm发射波长下扫描激发光谱，即可测得这一变化，计算所得的340/380 nm比值与细胞内钙离子浓度成正比。其解离常数Kd为145 nM，为定量换算提供了明确参数；同时510 nm的发射波长使其可与可见光染料搭配进行多色实验。产品为细胞膜通透形式（AM酯），进入细胞后被酯酶水解为活性形式，实现活细胞内钙测量。

校准友好：Rmax/Rmin支撑绝对钙定量

Fura-2的比率法特性带来校准上的便利：通过测定Rmax（钙饱和态比值）与Rmin（无钙态比值），结合Kd值即可换算绝对钙浓度。这一校准路径使实验从"相对变化观察"升级为"绝对浓度测定"，适合需要定量比较不同处理组间钙水平的实验设计。

与同类探针的选型对比

与Indo-1相比，二者同属比率型钙指示剂但机制不同：Fura-2为激发比率型染料，吸收光谱发生偏移（340/380 nm）；Indo-1为发射比率型染料，发射光谱发生偏移（400/480 nm）。选型时需结合仪器的激发光源与滤光片配置——Fura-2适配紫外激发、510 nm发射检测，适合荧光显微镜与荧光光度计平台。此外，比率法相比单波长探针还能减轻染料泄漏与光漂白的影响，在长时间活细胞成像中更具稳定性。综合来看，Fura-2, AM以比率法定量、校准友好和抗干扰能力为核心优势，适合需要可靠定量细胞内钙信号的药理学与细胞信号研究。

文献参考

Problems caused by high concentration of ATP on activation of the P2X7 receptor in bone marrow cells loaded with the Ca2+ fluorophore fura-2

Authors: Paredes-Gamero EJ, Franca JP, Moraes AA, Aguilar MO, Oshiro ME, Ferreira AT.

Journal: J Fluoresc (2004): 711

Photonic crystal fibre enables short-wavelength two-photon laser scanning fluorescence microscopy with fura-2

Authors: McConnell G, Riis E.

Journal: Phys Med Biol (2004): 4757

Abnormal spectra alteration observed in Triton calibration method for measuring [Ca2+]i with fluorescence indicator, fura-2

Authors: Xu T, Yang W, Huo XL, Song T.

Journal: J Biochem Biophys Methods (2004): 219