Amplite 荧光法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒的检测原理与标准曲线定量路径

检测原理：以硫代胆碱定量反映AChE活性

由艾美捷代理AAT Bioquest推出的Amplite 荧光法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒（绿色荧光），货号：11401，是一种以荧光微孔板形式定量乙酰胆碱酯酶（AChE）活性的检测工具。其检测原理建立在AChE的底物水解反应之上：AChE水解乙酰硫代胆碱，生成硫代胆碱，试剂盒利用Thiolite Green对该产物进行定量，荧光强度与硫代胆碱的生成量成正比，从而反映AChE活性。这一设计将酶活性转化为可读的荧光信号，使活性测定从间接推断变为直接定量。

靶点背景：高催化活性与多重分子形式

AChE是一种通过水解活性降解神经递质乙酰胆碱的酶，产物为胆碱和乙酸基团，主要分布于神经肌肉接头与中枢神经系统胆碱能突触，其活性发挥终止突触传递的作用。AChE催化活性极高——每个酶分子每秒约降解5000个乙酰胆碱分子。它还存在于红细胞膜上，构成Yt血型抗原。AChE存在多种分子形式，催化性质相似，但在寡聚组装方式和细胞表面附着方式上存在差异，这提示在样本制备与活性比较时需考虑来源与形式差异。

灵敏度与一步法流程

试剂盒灵敏度可达100 uL检测体积下0.1 mU/mL的AChE活性，官方称其为检测AChE活性的最灵敏方法之一。工作流程为一步法荧光检测格式，减少加样步骤与操作误差。仪器兼容性明确：荧光检测激发/发射波长为490/525 nm，适配常规荧光微孔板读数仪，官方示例数据即在Molecular Devices Gemini荧光微孔板读数仪上于黑色96孔板中测得剂量响应曲线。

组分构成与数据分析路径

试剂盒（货号11401，200次检测）包含五个组分：Thiolite Green（1瓶）、检测缓冲液（25 mL）、乙酰硫代胆碱（1瓶）、乙酰胆碱酯酶标准品（5 units）及DMSO（100 uL）。数据分析遵循标准曲线法：以空白标准孔的RFU读数作为阴性对照，从其他标准孔读数中扣除该值获得基线校正值，据此绘制标准曲线并拟合方程，再用该方程计算样本的AChE活性。从功能性角度看，该试剂盒以高灵敏度、一步法流程和明确的标准曲线定量路径为核心优势，适合神经药理学、胆碱能信号研究及AChE抑制剂筛选中对酶活性的可靠定量需求。

文献参考

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