HIS Lite OG488-三价NTA-镍复合物：突破传统单NTA的瞬时结合局限

由艾美捷代理AAT Bioquest推出的HIS Lite OG488-Tris NTA-Ni Complex （货号：12615）是一种基于三价NTA（tris-NTA）的荧光标记工具，专为多组氨酸标签蛋白的位点特异性、稳定非共价荧光标记而设计。与传统单NTA的瞬时结合不同，tris-NTA偶联的荧光团通过多价相互作用与多组氨酸标签蛋白形成更稳定的复合物。这种高选择性使该化合物能够在细胞裂解液和活细胞表面对目标蛋白实现选择性标记，而非依赖纯化后的纯蛋白体系。荧光tris-NTA偶联物还可用于溶液中及表面上三元蛋白复合物的分析。

实时报告蛋白相互作用：从检测到动态监测

过渡金属离子（如Ni离子）介导的多组氨酸标签蛋白与荧光tris-NTA偶联物的络合，为实时检测和监测蛋白-蛋白相互作用提供了灵敏的报告手段。OG488-tris-NTA化合物已被报道为一种灵敏的荧光探针，可用于检测细胞内、溶液中及固体表面上的多组氨酸标签蛋白。其激发适配蓝色激光，发射检测使用长通绿色滤光片（SYBR滤光片），与常规凝胶成像系统的配置兼容，便于快速接入现有检测流程。

母液与工作液的配制要点

母液配制：加入适量ddH₂O制备5–10 mM母液，未用完的母液应分装并于-20°C保存，避免反复冻融并尽量减少光照暴露。工作液配制：以PBS制备1–10 uM工作液，确保工作液量足以完全浸没凝胶；使用后弃去工作液，不可重复使用。

两种实验路径：凝胶染色与体外复合物形成

凝胶染色流程：按标准流程跑胶后，将凝胶置于固定液中固定60分钟（可用40%乙醇+10%乙酸作为固定液）；用超纯水洗涤两次；于工作液中孵育60分钟，确保凝胶完全浸没；弃去工作液并用PBS洗涤两次；随即成像。体外复合物形成流程：将His标签蛋白溶液与1–10 uM工作液按适当浓度混合（起始浓度可设为1–10 uM，需优化标记比例）；反应可在含50 mM HEPES/KOH（pH 7.4）、100 mM KCl、1 mM MgCl?、2 mM β-巯基乙醇、5%甘油的缓冲液或自选缓冲液中进行；室温或4°C孵育30分钟（需优化孵育时间与条件）；随后可进行柱纯化或任何下游处理。以上流程仅作为指南，需根据具体实验需求优化。

HIS Lite OG488 Tris-NTA NiComplex的化学结构

文献参考

Authors: Szczupak, Patrycja and Radzikowska-Cieciura, Ewa and Kulik, Katarzyna and Madaj, Rafa{l} and Sierant, Ma{l}gorzata and Krakowiak, Agnieszka and Nawrot, Barbara

Journal: Bioorganic Chemistry (2022): 105739

Selective binding, magnetic separation and purification of histidine-tagged protein using biopolymer magnetic core-shell nanoparticles

Authors: Zhou, Y., Yan, D., Yuan, S., Chen, Y., Fletcher, E. E., Shi, H., Han, B.

Journal: Protein Expr Purif (2018): 5-11

Quantification of Histidine-Rich Protein 3 of Plasmodium falciparum

Authors: Palani, B.

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