重组人BAFF蛋白，用于抗BAFF中和抗体筛选及贝利木单抗类似药活性比对

1. 产品概述

由艾美捷代理BPS Biosciences推出的重组人B细胞活化因子（BAFF，又称TNFSF13B）（His-Avi双标签）（货号：100194）的胞外区片段，覆盖氨基酸134–285（C端全长）。构建体N端融合6×His标签和Avi-Tag?，经亲和层析纯化。该产品适用于BAFF-受体结合研究、中和抗体筛选及自身免疫疾病相关药物开发等场景。

项目 | 规格

构建体 | His-Avi-BAFF(134–285端)

标签 | N端His标签 + Avi-Tag

宿主/表达系统 | HEK293哺乳动物细胞

分子量 | 20 kDa（SDS-PAGE因糖基化显示更高表观分子量）

纯度 | ≥90%

剂型 | 水相缓冲液

保存稳定性 | -80°C下至少6个月

2. 背景与功能

BAFF（B细胞活化因子）是肿瘤坏死因子配体超家族成员，在B细胞发育、存活、抗体产生和免疫应答中发挥核心调控作用。BAFF通过结合三种受体发挥功能：TACI（TNFRSF13B）、BCMA（TNFRSF17）和BAFF-R（TNFRSF13C），其中BAFF-R是B细胞存活信号的主要介导者。

生理状态下，BAFF维持着B细胞库的免疫平衡——过量的BAFF促进自身反应性B细胞存活，导致自身抗体产生和组织损伤。BAFF过表达与多种自身免疫病明确相关，包括系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿关节炎、干燥综合征和IgA肾病。基于此，BAFF已成为自身免疫疾病的重要治疗靶点。抗BAFF单克隆抗体贝利木单抗（belimumab）已获FDA批准用于SLE治疗，另有多种BAFF靶向药物处于临床研发阶段。

3. 产品设计与质量控制

3.1 构建体设计  

截短策略：仅表达胞外受体结合区（134–285），去除跨膜和胞内结构域，以可溶性形式呈现，便于体外结合实验。  

双标签设计：N端His标签用于IMAC亲和纯化和检测；Avi-Tag（15个氨基酸的肽段）可在生物素连接酶（BirA）催化下特异性生物素化，实现与链霉亲和素包被表面（如传感器芯片、磁珠、ELISA板）的高亲和力定向偶联，显著增强结合实验的灵敏度和一致性。

3.2 表达系统  

采用HEK293哺乳动物细胞表达，确保蛋白获得正确的翻译后修饰——BAFF在天然状态下为N-糖基化蛋白，糖链对受体结合亲和力有重要影响。SDS-PAGE中该蛋白表观分子量高于理论值（20 kDa），即为糖基化的典型特征。

3.3 纯度  

SDS-PAGE鉴定纯度≥90%，确保下游结合实验的背景信号最低化。

3.4 缓冲体系  

组成为8 mM磷酸盐（pH 7.4）、110 mM NaCl、2.2 mM KCl、20%甘油。生理pH和盐浓度维持蛋白天然构象，甘油支持长期低温稳定性。

4. 使用与保存指南

4.1 操作步骤  

1. 冰上解冻，轻柔混匀（严禁涡旋振荡——细胞因子对剪切力敏感，涡旋可导致聚集失活）；  

2. 解冻后快速离心（10,000×g，10秒）收集管壁液滴；  

3. 按单次用量分装，液氮速冻后转回-80°C长期保存；  

4. 避免反复冻融（每轮冻融可致活性损失10–20%）。

4.2 应用建议  

受体结合分析（ELISA/AlphaLISA）：利用Avi-Tag生物素化后，将BAFF固定在链霉亲和素包被板上，加入系列稀释的受体（BAFF-R、TACI、BCMA）或候选抑制剂，检测结合信号。生物素-链霉亲和素系统的高亲和力（Kd≈10^-15M）保证固定的稳定性和实验重复性。  

抑制剂/中和抗体筛选：设置BAFF-受体结合反应体系，加入梯度稀释的待测化合物或抗体，以阻断率为指标评价抑制效能。阳性对照可采用抗BAFF中和抗体或贝利木单抗。预孵育步骤（BAFF+抑制剂，室温，30分钟）后加入受体启动结合反应。  

表面等离子共振（SPR）：将生物素化BAFF固定在SA芯片上，分析不同受体或候选药物的结合动力学（ka、kd、Kd）。Avi-Tag介导的定向固定可避免蛋白随机偶联导致的活性位点掩蔽，获得更准确的亲和力数据。  

细胞学验证：将BAFF加入B细胞培养体系中，检测其促存活效应（如NF-κB激活、BAFF-R下游信号磷酸化），以验证批次间生物活性的一致性。

5. 注意事项

运输与接收：干冰运输，到货后立即存入-80°C。避免存放于自动除霜冰箱。  

生物素化处理：Avi-Tag的体外生物素化需使用BirA酶，建议在生物素化后通过脱盐柱去除游离生物素，以免干扰后续检测。  

糖基化影响：不同表达批次间糖基化模式可能存在轻微差异，如实验对糖型一致性要求极高，建议批量采购以降低批次间变异。  

安全性：仅供研究用途（Research Use Only），操作时遵循标准实验室规范。

6. 参考文献

1. Knight AK, et al. Clin. Immunol. 124 (2), 182-189 (2007)

2. Hever, A., et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104 (30), 12451-12456 (2007)