重组人COX1蛋白，支持高通量抑制剂筛选及时间依赖性不可逆抑制机制区分

1. 产品概述

由艾美捷代理BPS Biosciences推出的重组人环氧合酶1（COX1/PTGS1）全长蛋白（FLAG-His双标签）（货号：71110），覆盖氨基酸1–599（完整ORF）。C端依次携带FLAG标签和6×His标签，经亲和层析纯化。该产品适用于前列腺素合成通路研究、COX1/COX2选择性抑制剂筛选及抗炎、心血管药物开发等场景。

项目 | 规格

构建体 | COX1（1–599端）-FLAG-His

标签 | C端FLAG标签 + 6×His标签

宿主/表达系统 | Sf9昆虫细胞

分子量 | 71 kDa

纯度 | ≥90%

剂型 | 水相缓冲液

保存稳定性 | -80°C下至少6个月

2. 背景与功能

COX1是前列腺素-内过氧化物合酶家族的两个亚型之一，催化花生四烯酸转化为前列腺素H2（PGH2），该反应是类花生酸类物质生物合成的限速步骤。

COX1与COX2的差异具有重要临床意义：COX1在大多数组织中组成性表达（胃黏膜、血小板、肾），负责维持胃黏膜保护、血小板聚集和肾血流调节等生理功能；COX2则由炎症刺激诱导表达。传统非甾体抗炎药（NSAID，如阿司匹林、布洛芬）非选择性抑制COX1和COX2，其胃肠道副作用主要由COX1抑制所致。COX1在血小板中的高表达使其成为抗血小板治疗（低剂量阿司匹林）的关键靶点。

3. 产品设计与质量控制

3.1 构建体设计  

采用全长序列（1–599），保留N端信号肽和膜结合结构域，确保蛋白正确折叠并维持天然环氧合酶和过氧化物酶双活性。C端串联FLAG和His双标签提供两种独立的亲和检测方案，便于在不同实验平台间切换。

3.2 纯度与活性测定  

SDS-PAGE鉴定纯度≥90%，确保下游实验背景清晰。  

活性采用荧光法测定：在反应缓冲液中以花生四烯酸为底物、Ampliflu Red为荧光指示剂（Ex/Em = 535/590 nm），反映COX1双活性的完整功能。

3.3 缓冲体系  

组成为40 mM Tris-HCl（pH 8.0）、110 mM NaCl、2.2 mM KCl、0.04% Tween-20、20%甘油、0.1% Triton X-100和300 uM DDC（二乙基二硫代氨基甲酸酯）。关键组分：双去污剂体系维持膜蛋白溶解性和天然构象；DDC作为抗氧化剂保护血红素辅基；甘油支持长期低温保存。

4. 使用与保存指南

4.1 操作步骤  

1. 冰上解冻，轻柔混匀（严禁涡旋振荡——膜蛋白在剪切力下易聚集失活）；  

2. 解冻后快速离心（10,000×g，10秒）收集液滴；  

3. 按单次用量分装，液氮速冻后转回-80°C长期保存；  

4. 避免反复冻融（每轮活性损失15–30%）。

4.2 应用建议  

酶活性测定：推荐酶量0.1–5 ?g/反应，底物花生四烯酸需用过氧化物-free等级，避免背景氧化信号干扰。  

抑制剂筛选：阳性对照可用阿司匹林（不可逆，IC50≈0.5–2 uM）或布洛芬（可逆，IC50≈1–5 uM），预孵育15–30分钟后加底物启动反应。时间依赖性抑制剂（如阿司匹林）需延长预孵育至60分钟。  

选择性谱分析：建议与COX2蛋白平行筛选，计算选择性指数（SI = IC??(COX2)/IC??(COX1)），指导NSAID安全性优化。

5. 注意事项

运输与接收：干冰运输，到货后立即存入-80°C。  

去污剂兼容性：产品含Triton X-100和Tween-20，若下游实验（如SPR、质谱）对去污剂敏感，需更换缓冲液（建议补充替代性去污剂如0.02% DDM以防聚集）。  

DDC干扰：DDC可螯合金属离子，若下游实验涉及金属依赖性检测需评估干扰。  

安全性：仅供研究用途（Research Use Only），遵循标准实验室规范。

总结：本产品提供全长、高纯度（≥90%）、双标签（FLAG+His）的重组人COX1膜蛋白，保留天然环氧合酶和过氧化物酶双活性，适用于类花生酸通路机制研究及COX1/COX2选择性抑制剂筛选。双去污剂缓冲体系有效维持膜蛋白构象稳定性，严格遵循操作指南（避免涡旋和反复冻融）是确保数据重现性的关键。