重组人APRIL蛋白，适用于双靶向抑制剂（APRIL/BAFF双中和等）的体外效能评价

1. 产品概述

由艾美捷代理BPS Biosciences推出的重组人APRIL（A增殖诱导配体，又称TNFSF13/CD256）（His-Avi双标签）（货号：100254）的胞外区片段，覆盖氨基酸105–250（C端全长）。构建体N端融合6×His标签和Avi-Tag?，经亲和层析纯化。该产品适用于受体结合研究、中和抗体筛选及多发性骨髓瘤、IgA肾病等相关药物开发场景。

项目 | 规格

构建体 | His-Avi-APRIL(105–250端)

标签 | N端His标签 + Avi-Tag

宿主/表达系统 | HEK293哺乳动物细胞

分子量 | 20 kDa（SDS-PAGE因糖基化显示更高表观分子量）

纯度 | ≥90%

剂型 | 水相缓冲液

保存稳定性 | -80°C下至少6个月

2. 背景与功能

APRIL是肿瘤坏死因子配体超家族成员，主要通过结合受体BCMA（TNFRSF17）和TACI（TNFRSF13B）发挥生物学功能，在B细胞发育、自身免疫调节及长寿命浆细胞存活中起关键作用。

APRIL的临床相关性近年来受到高度关注：

多发性骨髓瘤（MM）：APRIL在MM患者骨髓微环境中显著高表达，通过激活BCMA受体促进肿瘤细胞增殖、诱导化疗耐药并营造免疫抑制微环境。靶向APRIL-BCMA轴已成为MM治疗的重要策略之一。

IgA肾病（IgAN）：APRIL过度激活促进致病性IgA1产生，驱动肾小球损伤。抗APRIL单抗sibeprenlimab已在IgAN临床试验中显示积极疗效。

双靶向策略：基于TACI受体改造的Povetacicept（ALPN-303）可同时中和APRIL和BAFF，兼具抑制自身反应性B细胞和浆细胞的双重效应，代表自身免疫病治疗的新方向。

3. 产品设计与质量控制

3.1 构建体设计  

截短策略：仅表达胞外受体结合区（105–250），去除跨膜和胞内结构域，以可溶性形式呈现，便于体外结合实验。  

双标签设计：N端His标签用于IMAC亲和纯化和检测；Avi-Tag可在BirA酶催化下特异性生物素化，实现与链霉亲和素表面的定向偶联，为SPR、ELISA等高要求结合分析提供理想的固定化方案。

3.2 表达系统  

采用HEK293哺乳动物细胞表达，确保蛋白获得正确的翻译后修饰。APRIL为N-糖基化蛋白，糖链对受体结合亲和力有重要影响。SDS-PAGE中该蛋白表观分子量高于理论值（20 kDa），即为糖基化的典型特征。

3.3 纯度  

SDS-PAGE鉴定纯度≥90%，确保下游实验背景信号最低化。

3.4 缓冲体系  

组成为8 mM磷酸盐（pH 7.4）、240 mM NaCl、2.2 mM KCl、20%甘油。较高盐浓度（240 mM NaCl）有助于维持APRIL三聚体结构的稳定性，甘油支持长期低温保存。

4. 使用与保存指南

4.1 操作步骤  

1. 冰上解冻，轻柔混匀（严禁涡旋振荡——细胞因子对剪切力敏感，涡旋可导致聚集失活）；  

2. 解冻后快速离心（10,000×g，10秒）收集管壁液滴；  

3. 按单次用量分装，液氮速冻后转回-80°C长期保存；  

4. 避免反复冻融（每轮冻融可致活性损失10–20%）。

4.2 应用建议  

受体结合分析（ELISA/AlphaLISA）：利用Avi-Tag生物素化后，将APRIL固定在链霉亲和素包被板上，加入系列稀释的受体（BCMA、TACI）或候选抑制剂，检测结合信号。生物素-链霉亲和素系统的高亲和力保证固定的稳定性和实验重复性。  

中和抗体筛选：针对APRIL治疗性抗体（如sibeprenlimab、zigakibart）的活性比对，设置APRIL-受体结合反应体系，加入梯度稀释的待测抗体，以阻断率为指标评价中和效能。预孵育步骤（APRIL+抗体，室温，30分钟）后加入受体启动结合反应。  

表面等离子共振（SPR）：将生物素化APRIL固定在SA芯片上，分析BCMA或TACI的结合动力学（ka、kd、Kd）。Avi-Tag介导的定向固定可避免蛋白随机偶联导致的活性位点掩蔽，获得更准确的亲和力数据。  

双靶向抑制剂评估：对于同时靶向APRIL和BAFF的双功能分子（如Povetacicept），建议使用APRIL和BAFF蛋白平行进行结合抑制实验，以评估双靶向活性的平衡性。

5. 注意事项

运输与接收：干冰运输，到货后立即存入-80°C。避免存放于自动除霜冰箱。  

生物素化处理：Avi-Tag的体外生物素化需使用BirA酶，建议在生物素化后通过脱盐柱去除游离生物素，以免干扰后续检测。  

三聚体结构：APRIL天然以三聚体形式结合受体，缓冲体系中的高盐（240 mM NaCl）有助于维持该构象。若更换缓冲液，应避免过低盐浓度（<150 mM NaCl）以防三聚体解聚。  

糖基化影响：不同表达批次间糖基化模式可能存在轻微差异，如实验对糖型一致性要求极高，建议批量采购以降低批次间变异。  

安全性：仅供研究用途（Research Use Only），操作时遵循标准实验室规范。

6. 参考文献

Xiano Y. et al., 2008 European Journal of Immunology. 38(12): 3450-3458.

Kawasaki A., et al., 2007 Rheumatology. 46(5): 776-782.