JaICA：抗8-OHdG抗体

氧化应激研究的“黄金标志物”

8-OHdG（8-羟基脱氧鸟苷）作为DNA氧化损伤的关键生物标志物，在癌症、衰老、神经退行性疾病等研究中具有极高价值。然而，其免疫组化（IHC）检测常面临物种差异大、背景干扰多、染色稳定性差三大痛点，导致结果可靠性降低。日本免疫学会认证抗体抗8-OHdG/8-oxo-dG单克隆抗体（货号：MOG-020P/MOG-100P）通过系统性技术优化，为您的氧化损伤研究提供跨物种、高灵敏、低背景的一站式解决方案！

1 适用物种：

适用于测试多种动物的组织样本，例如人、兔、大鼠等。对于来自小鼠组织样本的小鼠IgG，需要一个额外的步骤。

2 实验方案：

免疫组织化学检测的实验方案见：“突破氧化损伤检测瓶颈！抗8-OHdG抗体（克隆N45.1）IHC标准化操作指南”。

3 免疫组织化学条件：

问：8-OHdG免疫组织化学的关键点是什么？

答：染色条件应根据样本种类或其状态决定。通常，正常细胞中存在10?? /dG水平的8-OHdG。许多研究报道，氧化应激的增加会使8-OHdG的量增加几个百分点或数倍。如果无法观察到样品与对照组织之间的明显差异，则应改变染色条件，例如一抗的浓度或其他因素。此外，在存在羟基自由基产生源（如H?O?或紫外线）的情况下，正常DNA可能被氧化生成8-OHdG。请避免使用H?O?来阻断内源性过氧化物酶活性。我们推荐使用碱性磷酸酶作为标记物。染色部位主要在细胞核。

4 应用于培养细胞：

问：培养的细胞在抗原修复过程中从载玻片上脱落。如何防止这种情况？

答：这取决于细胞类型或实验条件，但在某些情况下，细胞很容易从载玻片上脱落。这种情况下，推荐使用布安固定液（Bouin solution）进行固定，以替代福尔马林溶液。经布安固定液固定的样本无需抗原修复即可进行染色。

5 内源性生物素的封闭：

对于肾脏、肝脏、前列腺和肠道组织，可能需要封闭内源性生物素。这种情况下，请在一抗反应前封闭内源性生物素。

(1) 用0.001% 亲和素 (Avidin) / PBS 孵育10-15分钟。

(2) 用PBS洗涤。

(3) 用0.001% 生物素 (Biotin) / PBS 孵育10-15分钟。

(4) 用PBS洗涤。

6 冰冻样本：

抗8-OHdG单克隆抗体可能适用于冰冻切片，但未经测试。

7 小鼠组织：（通过德州红 (Texas red) 检测）

(1) 封闭内源性生物素（试剂）。

(2) 封闭内源性小鼠IgG（MOM试剂盒）。

(3) 抗8-OHdG抗体（5 ug/mL，室温30分钟）。

(4) 生物素标记的抗小鼠IgG抗体（室温10分钟）。

(5) 德州红标记的亲和素 (Texas red-avidin)（10 ug/mL）。

参考文献：Fujihara et.al., PLoS ONE 3(9),e3119 (2008)

8 人源培养细胞：（通过Fluor488检测）

(1) 4%多聚甲醛固定。

(2) RNase 100 ug/mL, 10mM Tris-HCl pH7.5, 1mM EDTA, 0.4M NaCl（37°C 1小时）。

(3) 蛋白酶K 10 ug/mL（室温7分钟）。

(4) 4N HCl处理（室温7分钟）。

(5) PBS中含0.2% Triton X-100。

(6) 抗8-OHdG抗体（按1:50稀释）。

(7) Fluor488标记的抗小鼠IgG山羊抗体（按1:200稀释）。

参考文献：Lee YA, at. al.,Biol Pharm Bull 31(6)p1265-1269(2008)

以上概述了抗8-OHdG抗体在不同样本类型（如组织切片、培养细胞）中的应用关键点，包括物种适用性、防止非特异性背景的方法（如使用碱性磷酸酶系统替代过氧化物酶、封闭内源性生物素和小鼠IgG）、针对不同样本的固定与抗原修复优化方案，并提供了来自已发表文献的具体实验流程示例供参考。成功的染色需根据具体样本类型和状态优化条件。

抗8-OHdG单抗（MOG-020P）以可重复的实验方案、跨物种的检测能力、经文献验证的结果可靠性，成为氧化应激研究者的理想工具。无论您深耕基础机制，还是探索疾病关联，它都将助您捕捉每一个DNA损伤的真相！