Atlas Antibodies：磷酸核糖基焦磷酸氨基转移酶

文献标题：Phosphoribosyl Pyrophosphate Amido Transferase: A New Prognostic Biomarker for Hepatocellular Carcinoma

DOI: 10.2147/IJGM.S340758

这篇文章的核心内容是研究磷核糖焦磷酸酰胺转移酶（PPAT）在肝细胞癌（HCC）中的表达情况及其作为预后生物标志物的潜力。以下是对其研究背景、研究方法、研究内容和研究结果的详细解析：

研究背景

肝细胞癌（HCC）是全球范围内最常见的肝癌类型，占肝癌病例的约90%，并且是癌症相关死亡的第三大原因。尽管目前有手术切除、经动脉栓塞、放疗和化疗等多种标准治疗方法，但这些治疗手段往往效果不佳，导致HCC患者预后较差。因此，寻找新的治疗靶点和预后生物标志物对于改善HCC患者的预后至关重要。PPAT是嘌呤从头合成途径中的关键限速酶，负责将谷氨酰胺的γ-氮转移到5-磷酸核糖焦磷酸（PRPP）上。在癌症恶性发展过程中，碳和氮代谢发生改变，谷氨酰胺氮的代谢命运受到GLS1和PPAT的调控，从衰老途径转向三羧酸循环和核苷酸合成。已有研究发现PPAT与乳腺癌、肺癌、前列腺癌、结直肠癌等多种癌症相关，但其在HCC中的临床意义和生物学作用尚不清楚。

研究方法

1. 样本收集：研究者构建了一个包含90例HCC组织和90例正常肝组织的组织芯片（TMA），这些样本均来自上海奥普生物技术有限公司。所有患者的临床信息完整，包括年龄、性别、肿瘤分级、TNM分期和生存时间。

2. 免疫组化（IHC）分析：将组织芯片置于63°C烤箱中烘烤1小时后脱蜡，然后在全自动染色机中完成脱蜡、水化等步骤。使用PPAT一抗（稀释比例1:25，HPA036091，Atlas Antibodies AB）在4°C下孵育过夜。随后，将切片在DAKO全自动免疫组化染色系统中进行封闭、二抗结合和DAB显色，最后用苏木精染色1分钟，经0.25%盐酸酒精分化后，用自来水冲洗超过2分钟，室温下干燥并用中性树脂封片。

3. 免疫染色强度评估：由三位经验丰富的高级病理学家独立评估PPAT染色强度和阳性细胞比例，染色强度分为0（阴性）、1（+）、2（++）和3（+++）。根据“染色强度评分”和“染色阳性率”的乘积将样本分为PPAT低表达（评分<2）和高表达（评分≥2）两组。

4. 统计分析：采用单因素方差分析和双尾t检验进行比较，ROC曲线分析用于确定PPAT高表达的临界值，Kaplan-Meier方法用于生存曲线分析，P值小于0.05被认为具有统计学意义。

研究内容

研究的主要内容是通过比较HCC肿瘤组织和邻近正常组织中PPAT的表达水平，探讨PPAT表达与HCC临床病理特征之间的关系，以及PPAT作为HCC预后生物标志物的潜在价值。

研究结果

PPAT在HCC肿瘤组织中的表达水平升高：通过组织芯片评估了90例HCC和90例正常肝组织中PPAT的表达水平。免疫组化染色结果显示，PPAT的免疫反应主要出现在肿瘤细胞的细胞质中，且HCC肿瘤组织中PPAT的表达水平高于邻近正常组织（P<0.001）。

PPAT表达与HCC临床病理特征的关系：研究发现PPAT的表达与肿瘤分级（P=0.014）、PD-L1（P<0.001）和CTLA4（P=0.003）显著相关。肿瘤分级越高，PPAT表达越高。在PD-L1高表达组中，PPAT也呈高表达。此外，PPAT表达与年龄、性别、TNM分期、肝硬化、甲胎蛋白（AFP）水平或丙氨酸转氨酶（ALT）水平均无显著关联。

PPAT高表达与HCC患者低生存率相关：Kaplan-Meier生存分析曲线和Log-Rank统计检验显示，PPAT高表达的HCC患者总生存期（P=0.023）和无病生存期（P=0.007）显著缩短。

研究结论

研究表明，PPAT表达水平与HCC的预后相关，PPAT高表达预示着HCC患者预后不良。此外，研究还发现HCC肿瘤组织中PD-L1和CTLA4的表达上调，这两种免疫治疗相关因子具有强大的免疫调节作用。研究提示PPAT可能参与免疫抑制，有望作为预测免疫治疗效果的靶点，值得进一步研究。尽管PPAT作为HCC预后的预测指标具有简单、便捷的优势，但也存在获取组织样本困难、仅能预测术后患者预后的局限性。因此，需要进一步研究以实现PPAT水平的多功能和更便捷检测，例如通过测量其在血液中的表达水平来评估HCC的预后。

文献中引用了Atlas Antibodies公司生产的PPAT多克隆抗体（HPA036091 Anti-PPAT Antibody）。这种抗体在本研究中主要用于免疫组化（IHC）分析，以检测肝细胞癌（HCC）组织中PPAT蛋白的表达水平。

主要应用

免疫组化（IHC）：用于检测组织切片中PPAT蛋白的表达水平和定位。在本研究中，该抗体被用于比较HCC肿瘤组织和邻近正常组织中PPAT的表达差异。

验证研究：该抗体经过Atlas Antibodies公司严格验证，适用于多种应用，包括免疫组化、西方印迹（WB）和免疫细胞化学-免疫荧光（ICC-IF）。在本研究中，其在IHC中的特异性和可靠性得到了验证。

特点

高特异性：该抗体针对PPAT蛋白的特异性表位设计，能够准确识别目标蛋白。

验证数据：每种抗体都有超过500张的染色图像支持，确保其在多种组织和细胞中的特异性和可靠性。

适用范围：除了本研究中的IHC应用外，该抗体还适用于其他多种研究方法，如Western Blot和免疫细胞化学。

总结来说，Atlas Antibodies的PPAT抗体（HPA036091）在本研究中用于IHC分析，成功检测了HCC组织中PPAT蛋白的表达水平，并为研究提供了可靠的实验数据。