神经元通过突触互相交流传递信号,电化学信号在此处转换为生化信号。突触前膜释放神经递质进入突触间隙,突触后膜上的相应受体蛋白接收这些信号。在此过程中,突触小泡与突触前膜融合,使小泡内膜短暂暴露于细胞外空间。
在培养的海马神经元中,可利用培养基中添加的抗体结合突触小泡内腔蛋白表位。这些抗体在随后的网格蛋白介导的内吞作用中被纳入突触小泡。通过这种方法,可以选择性地标记具有活跃小泡循环的突触(图 1)。例如,若使用针对 Synaptotagmin1 的抗体,所有活跃突触均会独立于其神经递质表型而被标记(图 2)。相比之下,针对囊泡 GABA 转运体(VGAT)的抗体可选择性地标记仅活跃的抑制性突触。
当使用预先标记的抗体时,无需额外固定或应用任何二抗,即可直接观察小泡。
或者,可将一抗与 FluoTags 纳米标记的二抗预先孵育,形成一抗 - 二抗复合物。这些复合物随后可像预先标记的一抗一样用于活神经元的直接标记。
图 1:利用针对突触小泡蛋白内腔表位的荧光标记抗体标记循环突触小泡。
图 2:标记培养海马神经元中的循环小泡(产品 105 311AF)。活细胞与标记抗体在培养基中孵育 30 分钟。
内吞作用结束后,突触小泡腔通过质子 ATP 酶重新酸化。由此产生的质子梯度对突触小泡重新装载神经递质分子至关重要,这一过程由特定的囊泡神经递质转运体介导,为下一次融合做准备。CypHer5E 和 AcidiFluor Orange 等 pH 敏感型荧光染料仅在酸性环境中发出荧光。相应的抗体偶联物非常适合检测活细胞中的循环突触小泡,因为它们仅在抗体完全内化且突触小泡腔重新酸化后才会发光(图 2)。
Synaptic Systems 提供了一系列针对突触小泡蛋白内腔表位的抗体,这些抗体适用于基于活动的循环小泡标记。我们提供多种不同荧光标记的偶联物,以满足您的确切需求。
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