Enzo：宿主蛋白 (HCP) 残留ELISA检测试剂盒

摘要：如何检测宿主蛋白残留呢？你是否还在为生物工艺开发中是否为CHO宿主蛋白、大肠杆菌宿主、HEK293T细胞宿主蛋白残留忧愁呢？本文将为你讲解如何检测宿主蛋白残留检测方法。

1.为啥要检测宿主蛋白？

生物制品通常利用重组技术，通过宿主细胞（如细菌、酵母、哺乳动物、昆虫或植物细胞）的表达系统进行生产。这类产品涵盖单克隆抗体、重组蛋白和疫苗等。在生产和纯化过程中，难以避免会引入宿主细胞蛋白（Host Cell Protein，HCP）杂质。这些杂质既包括宿主细胞蛋白，也包括宿主细胞分泌的促生长因子等。宿主细胞蛋白（HCP）作为过程相关杂质，其残留可能对生物制品的质量、安全性和有效性产生不良影响。例如，HCP可能引发免疫原性反应、改变产品的稳定性或活性，甚至导致患者出现不良反应。因此，在生物制品的开发和生产过程中，HCP的检测和控制是关键步骤。

图1 宿主蛋白 (HCP) 的产生

2. HCP的检测采用酶联免疫吸附测定（ELISA）作为主要方法，在2020版《中国药典》三部通则3412/3413/3414中提到的宿主蛋白残留检测方法均为ELISA法。

美国药典USP<1132>章节中也提到可采用电泳法、ELISA和LC-MS/MS等方法检测宿主细胞蛋白（Host Cell Protein，HCP）含量，且由于ELISA法操作简便、快速、高灵敏、高通量等特点，而被推荐为宿主细胞蛋白（Host Cell Protein，HCP）检测的首选方法。

图2 各国法规对宿主蛋白残留(HCP)检测要求

3. 何为抗体覆盖率( Coverage)？

宿主细胞蛋白（Host Cell Protein，HCP）检测领域，抗体覆盖率( Coverage) 堪称“核心裁判”——这一指标不仅频繁接受监管审视，更直接决定检测结果是否精准、稳定，贯穿产品从临床前药物研发到商业化上市的全过程。

在商业化申报之前，监管机构要求治疗性蛋白产品的多克隆抗体必须经过验证，以确保其对产品中HCP能被检测抗体结合。ELISA法的准确性主要取决于多克隆抗体对HCP的覆盖率。

免疫亲和纯化、2-D凝胶电泳和蛋白免疫印迹实验（Western Blotting）是表征HCP ELISA抗体及其覆盖率的推荐方法。(《美国药典》1132和《欧洲药典》2.6.34)，在早期的在更多项目中，2D-WB所得到的覆盖率一般在50-60%之间，可满足早期临床前 (IND) 申报要求。但对于BLA阶段，近年来随着监管机构的要求趋严，HCP抗体覆盖率略低，对药物上市申报会产生风险。

4.Enzo life Science 

为精准工艺监控而生，Enzo 成立于1976年，通过了ISO9001:2015、IS013485:2016、GMP质量管理体系认证。其次，Enzo life Science 采用双向凝胶电泳-免疫印迹（2-D SDS-PAGE-Western blot）技术测定抗体的覆盖率，生产的HCP ELISA试剂盒专为定量检测采用不同表达系统生产的生物制药产品中的宿主细胞蛋白（HCP）残留而设计，针对试剂盒的特异性、灵敏度强，批次内和不同批次间 (CV＜10%)，精密度、抗体覆盖率良好等做了实验验证，可满足制药工艺开发、质量控制及产品放行检测的需求。

表1：宿主蛋白 (HCP) 残留ELISA检测试剂盒

5. 如：宿主蛋白CHO残留检测ELISA试剂盒，CHO HCP ELISA kit (Cat#ELS-ENZ-KIT128) 的抗体的覆盖率及真实样品明显高于竞品公司。

图3. Enzo Life Sciences与竞品公司的抗体覆盖率及真实样品检测表现进行了对比分析。

5.1 宿主蛋白CHO残留检测ELISA试剂盒，CHO HCP ELISA kit (Cat#ELS-ENZ-KIT128) 灵敏度和检测范围测定：低至10ng/mL，检测范围：3ng/mL~810ng/mL

图4.宿主蛋白CHO残留检测ELISA试剂盒，CHO HCP ELISA kit (Cat#NZ-KIT128)灵敏度测定

表2. CHO HCP ELISA kit (Cat#NZ-KIT128)重复性好，同批次间和不同批次间CV＜10%

6.生物工艺相关ELISA 试剂盒