Cayman：组蛋白H3（瓜氨酸化R2+R8+R17）单克隆抗体（克隆11D3）- 辣根过氧化物酶偶联

全套研究组合方案，从检测到机制解析的全流程科研方案

瓜氨酸化修饰（Citrullination）是关键的蛋白质翻译后修饰，由肽酰精氨酸脱亚胺酶（PADs）催化，将蛋白质中的精氨酸残基转化为瓜氨酸残基，通过改变氨基酸电荷与结构，调控蛋白质构象、结合能力及功能。其在人体生理活动中作用核心，如中性粒细胞通过 PAD4 催化组蛋白瓜氨酸化形成胞外陷阱（NETs）抵御病原体，组蛋白瓜氨酸化还能重塑染色质影响基因表达，PAD6 介导的修饰更保障卵母细胞成熟与胚胎发育。

而当 PAD 酶活性失控引发异常瓜氨酸化时，会打破生理平衡：在类风湿关节炎中，关节滑膜异常瓜氨酸化蛋白成为自身抗原，诱发免疫攻击；在肿瘤、神经退行性疾病中，异常修饰也参与病理进程。因此，深入解析瓜氨酸化修饰的机制、关联疾病的分子机制，需依赖系统的研究工具与方法组合，为后续探索提供基础。

一、产品概述

二、产品组合策略（基于研究需求，仅供参考）

组合 1：瓜氨酸化组蛋白（H3/H4）特异性检测与验证

·研究方向：精准检测样本中 H3/H4 瓜氨酸化修饰，排除假阳性

·核心产品：44902（H3 HRP 单抗）+ 17926（人重组 H3）+ 38258（人重组 H4）+ 30773（泛 Citrulline 单抗）

·互补逻辑：

a. 重组 H3/H4（17926/38258）作为阳性对照，确保检测体系有效；

b. 44902 靶向 H3 特异性位点，30773 泛识别瓜氨酸化，二者结果互证，避免单一抗体偏差。

组合 2：瓜氨酸化蛋白 “富集 - 鉴定 - 定量” 闭环

·研究方向：从复杂样本中分离瓜氨酸化蛋白，明确修饰位点并定量

·核心产品：44657（H3 亲和树脂）+ 17450（瓜氨酸探针）+ 44511（泛 Citrulline HRP 单抗）+ 27769（H3 R26 肽标准品）

·互补逻辑：

c. 44657 富集 H3 瓜氨酸化蛋白，17450 标记全样本瓜氨酸化蛋白，覆盖 “特异性富集 + 全谱标记”；

d. 44511 定量总修饰水平，27769 校准 H3 单一位点含量，实现 “定性（富集 / 标记）- 定量（抗体 / 标准品）” 闭环。

组合 3：自身免疫病（如 RA）瓜氨酸化相关抗体筛查

·研究方向：筛查患者样本中瓜氨酸化靶标自身抗体，验证抗原特异性

·核心产品：502120（10 重 Panel）+ 17939（H3 单抗）+ 20582（牛源核心组蛋白）+ 44412（低内毒素泛 Citrulline 单抗）

·互补逻辑：

e. 502120 高通量筛查多靶标抗体（如 PAD4、瓜氨酸化纤维蛋白原）；

f. 20582 作为阳性抗原对照，17939/44412 验证 H3 瓜氨酸化抗原与抗体的特异性结合，适配临床样本检测需求。

三、实验设计（关键步骤 + 合理预期）

方案 1：LPS 诱导巨噬细胞 H3/H4 瓜氨酸化检测

1. 研究目标

验证炎症刺激下（LPS）巨噬细胞中 H3/H4 瓜氨酸化水平变化

2. 核心材料

·细胞：RAW264.7 巨噬细胞

·产品：44902、30773、17926、38258

3. 关键步骤

1）. 样本处理：细胞分对照组（无处理）、LPS 组（1μg/mL，孵育 6/12/24h），提取核蛋白并定量；

2）. WB 检测：核蛋白（20μg）+ 阳性对照（17926/38258，5μg）上样，一抗用 44902（1:1000）、30773（1:2000），HRP 二抗显影，ImageJ 定量条带灰度；

3）. ELISA 验证：核蛋白包被 96 孔板，44902/30773 检测，450nm 读值，计算修饰水平。

4. 预期结果（基于文献共识）

·LPS 组 44902/30773 检测的条带灰度、ELISA OD 值显著高于对照组，6h 达峰值（炎症早期瓜氨酸化激活）；

·阳性对照条带清晰，阴性对照（未修饰组蛋白）无信号，证明检测特异性。

方案 2：乳腺癌细胞瓜氨酸化 H3 富集与鉴定

1. 研究目标

富集 MCF-7 细胞中瓜氨酸化 H3，鉴定修饰位点并定量

2. 核心材料

·细胞：MCF-7 乳腺癌细胞

·产品：44657、17450、44511、27769

3. 关键步骤

1）. 富集与标记：500μg 细胞总蛋白用 44657 孵育 4h（富集 H3），100μg 总蛋白用 17450（10μM）37℃标记 1h；

2）. WB 验证富集效率：富集蛋白（20μg）、标记蛋白（20μg）上样，44511（1:2000）检测，比较富集前后条带强度；

3）. 质谱与定量：富集蛋白胰酶酶解后 LC-MS/MS 鉴定修饰位点，用 27769 建立标准曲线，ELISA 定量 H3 R26 修饰含量。

4）. 预期结果（基于组蛋白修饰规律）

·富集后条带强度是总蛋白的 5-10 倍（符合亲和富集常规效率）；

·质谱鉴定到 H3 R2/R8/R17/R26 位点修饰（H3 常见瓜氨酸化位点），R2/R8/R17 丰度最高；

·H3 瓜氨酸化含量约 1.0-1.8ng/μg 总蛋白（基于类似肿瘤细胞研究的合理估算）。

方案 3：RA 患者血清瓜氨酸化自身抗体筛查

1. 研究目标

对比 RA 患者与健康人血清中瓜氨酸化相关自身抗体差异

2. 核心材料

·样本：RA 患者血清（30 例）、健康人血清（30 例）

·产品：502120（10 重 Panel）+ 20582（牛源组蛋白）+ 17939（H3 单抗）

3. 关键步骤

1）. Panel 筛查：血清稀释 1:100，按 502120 说明书操作，荧光检测并计算各抗体浓度；

2）. WB 验证：20582（1μg / 孔）、17926（1μg / 孔）转膜，血清（1:200）为一抗，HRP 二抗显影，比较两组条带；

3）. 免疫荧光共定位：LPS 诱导 RAW264.7 瓜氨酸化，爬片后用 RA 血清（1:100）+17939（1:500）孵育，共聚焦观察共定位。

4）. 预期结果（基于 RA 临床研究共识）

·RA 组瓜氨酸化组蛋白 / PAD4 / 纤维蛋白原自身抗体浓度显著高于健康组（P<0.05），未修饰靶标抗体无差异；

·RA 血清与 20582/17926 结合条带强度更高；

·血清抗体与 17939 标记的 H3 在细胞核共定位（证明抗体特异性结合瓜氨酸化 H3）。

四、应用价值（聚焦实际需求）

1. 基础机制研究

·组合 1 可解析 H3/H4 瓜氨酸化在炎症 / 肿瘤中的位点特异性功能（如 H3 R26 修饰与 DNA 损伤修复的关联）；

·组合 2 的 “富集 - 质谱” 流程可发现新的瓜氨酸化靶蛋白，补充修饰机制研究。

2. 疾病标志物开发

·组合 3 可筛选 RA “瓜氨酸化蛋白 - 自身抗体” 双标志物（如瓜氨酸化 H3 + 抗 H3 抗体），提升诊断灵敏度（较单一标志物高 20%-30%，参考临床检测常规提升范围）；

·组合 2 可发现肿瘤特异性瓜氨酸化位点（如 MCF-7 中 H3 R26 修饰），为癌症早期诊断提供靶点。

3. 药物研发支持

·基于组合 1 建立 PAD 酶抑制剂筛选模型：LPS 诱导巨噬细胞后，用 44902/30773 检测药物对 H3/H4 瓜氨酸化的抑制效果，评估候选药物活性；

·组合 3 可用于药物临床试验：监测 RA 患者治疗后瓜氨酸化自身抗体水平变化，评估疗效。

Cayman Chemical的瓜氨酸化产品线不仅产品种类齐全，而且彼此之间具有很强的协同性和互补性。研究人员可以根据具体科学问题，灵活搭配这些工具，构建从基础到转化、从体外到体内的高效研究路径，有力推动瓜氨酸化这一重要蛋白质翻译后修饰领域的科学发展。

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