Zedira--微生物转谷氨酰胺酶在抗体特异性定位与固定中的应用探索（T300—Microbial transglutaminase (mTG)）

发布者：艾美捷科技发布时间：2026-05-18

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文献链接：https://pubs.acs.org/doi/full/10.1021/acs.langmuir.5c06485

原文题目：Scope of Microbial Transglutaminase for Site-Specific and Oriented Immobilization of Native Antibodies from Various Host Species

DOI:https://doi.org/10.1021/acs.langmuir.5c06485

发布日期：Published February 27, 2026

在生物医学和生物分析领域，抗体的功能化修饰是开发高灵敏度生物传感器和诊断工具的关键步骤。传统的化学偶联方法虽能实现抗体与标记物或固定化试剂的连接，但往往缺乏特异性，易干扰抗体的抗原结合能力。近年来，微生物转谷氨酰胺酶（Microbial Transglutaminase, mTG）作为一种新兴的酶促偶联工具，因其能够特异性地修饰抗体Fc区域而备受关注。

本文解读的文献《Scope of Microbial Transglutaminase for Site-Specific and Oriented Immobilization of Native Antibodies from Various Host Species》详细探讨了mTG在多种宿主来源抗体特异性定位与固定中的应用潜力。

文章重点

关键字：微生物转谷氨酰胺酶（mTG）；抗体-药物偶联物；特异性偶联

对抗体进行化学修饰以偶联标记物或固定化试剂，对于生物传感器的开发至关重要。通常情况下，偶联通过化学方法实现，利用天然抗体上的反应性胺基和巯基；然而，这种非特异性方法可能会干扰抗体功能。微生物转谷氨酰胺酶（mTG）是一种已被用于将化学修饰剂位点特异性偶联至天然抗体Fc区域的酶，但迄今为止，mTG介导的偶联仅限于人源IgG的抗体-药物偶联物的生产。在本研究中，我们评估了mTG靶向IgG的范围和多功能性，旨在实现位点特异性偶联以促进定向固定化。将荧光标记肽偶联至多种常用于生产单克隆（如小鼠IgG1和大鼠IgG1）和多克隆（如兔IgG和山羊IgG）抗体的IgG宿主物种和亚类。

SDS-PAGE证实了该肽与这些IgG亚类的位点特异性偶联。此外，通过Western blot分析证实，NH2–PEG4-生物素被化学酶法安装于每种受试IgG的Fc区域。将位点特异性生物素化抗体固定于链霉亲和素包被的基质上，以功能学实验评估抗原结合活性。与通过常规化学偶联制备的随机生物素化抗体固定后构建的功能学实验相比，生物素的位点特异性偶联促进了定向捕获抗体层的形成，从而增强了抗原结合。这些结果凸显了mTG在将天然抗体进行位点特异性偶联以改善生物传感平台分析性能方面的广泛应用前景。

研究方法与结果

1. 抗体选择与预处理：
研究选用了多种商业可得的IgG抗体，包括人IgG1和IgG2、小鼠IgG1和IgG2b、大鼠IgG1以及兔和山羊的多克隆IgG。在修饰前，抗体通过PNGase F处理去除N297位的糖基化，以提高修饰效率。

2. mTG介导的荧光肽修饰：
使用mTG将荧光标记的短肽（如dansyl-KKCC）特异性地修饰到去糖基化的IgG抗体的Fc区域。SDS-PAGE分析证实了修饰的特异性，仅在重链上观察到荧光信号。

3. mTG介导的生物素修饰与定向固定：
进一步，研究通过mTG将NH2-PEG4-biotin修饰到IgG抗体的Fc区域，实现了抗体的生物素化。Western blot分析验证了修饰的特异性，且HABA-avidin定量显示每个抗体分子上成功修饰了约2个生物素分子。

4. 抗原结合能力评估：
通过将生物素化的抗体固定在链霉亲和素功能化的表面上，评估了其抗原结合能力。与随机生物素化的抗体相比，mTG介导的特异性生物素化显著提高了抗原的结合能力，证明了定向固定的优势。

本研究成功展示了mTG在多种宿主来源和抗体亚类中的广泛适用性，通过特异性修饰实现了抗体的定向固定。相比传统化学修饰方法，mTG介导的修饰不仅提高了修饰的均一性，还显著增强了抗体的抗原结合能力，为生物传感平台的开发提供了强有力的工具。

主要发现：

·mTG能够特异性地修饰多种宿主来源和抗体亚类的Fc区域。

·mTG介导的生物素化实现了抗体的定向固定，提升了抗原结合能力。

·该方法简单、高效，适用于商业抗体的修饰，具有广泛的应用前景。

mTG：特异性修饰抗体的酶促工具

产品亮点：Zedira (catalog #T300) Microbial Transglutaminase (mTG)

mTG是一种能够催化酰基转移反应的酶，它特别擅长识别并修饰抗体Fc区域中的特定谷氨酰胺残基（如Q295），通过形成酰胺键将含有伯胺的修饰物共价连接到抗体上。这一特性使得mTG成为实现抗体特异性修饰和定向固定的理想工具。

Andracon 重组微生物转谷氨酰胺酶产品信息

产品名称	Andracon – 重组微生物转谷氨酰胺酶
产品型号	T300
别名/同义词	EC 2.3.2.13；蛋白质-谷氨酰胺-γ-谷氨酰基转移酶
分子量	38,333.6 Da
比活性	> 30 U/mg
外观	白色冻干固体
配方	纯化转谷氨酰胺酶经50 mM HEPES（pH 7.4）冻干
来源	在大肠杆菌（E. coli）中重组表达；基因来源于Streptomyces mobaraensis
产品特点	重组表达生产超纯、高活性批间质量一致无需许可授权依据标准操作规程（SOP），在ISO9001:2015认证环境中生产
催化反应	催化肽键谷氨酰胺残基的γ-羧酰胺基团与多种伯胺之间的酰基转移反应
主要应用	蛋白质标记蛋白质固定化蛋白质偶联蛋白质修饰抗体药物偶联物（ADCs）的生产
可偶联功能标记	生物素、荧光染料、点击化学试剂、细胞毒素等（需含伯胺）
替代产品	替代旧型号 T001 和 T153
复溶方法	加入冻干时所用体积的H2O（具体体积参见COA），轻轻旋转西林瓶直至固体溶解
储存条件	冻干粉于 -80°C 保存；复溶后分装的工作液于 -80°C 保存。若无法储存于 -80°C，建议储存于 ≤ -20°C
注意事项	操作或使用前请务必获取、阅读并遵守材料安全数据表（MSDS）中的注意事项。本产品未经过用于人体、动物或体外诊断用途（如食品、消费品、饲料、化妆品、药品、医疗器械等）的适用性测试，因此未获批准用于此类用途。如客户拟将本产品用于上述用途，客户须自行负责获取任何必要的批准并满足适用法律法规的相关要求。

传统化学修饰方法往往导致抗体修饰的异质性，影响抗体的生物活性和分析性能。尽管已有多种特异性修饰策略被报道，但它们大多依赖于复杂的蛋白质工程或条件苛刻的化学反应，限制了其在商业抗体中的广泛应用。本研究旨在评估mTG在多种宿主来源（包括人、小鼠、大鼠、兔和山羊）和抗体亚类中的特异性和通用性，通过mTG介导的特异性修饰实现抗体的定向固定，从而提升生物传感平台的性能。

随着生物技术的不断发展，mTG作为一种绿色、高效的酶促修饰工具，将在抗体工程、生物传感和诊断技术等领域发挥越来越重要的作用。未来研究可进一步探索mTG在其他类型抗体（如单链抗体、纳米抗体）中的应用，以及开发更多功能化的修饰物，以满足不同领域的需求。

通过本文的解读，我们希望科研学者能够对mTG在抗体特异性定位与固定中的应用有更深入的了解，为相关领域的研究提供新的思路和方向。

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