血清制备
1.取血后，37oC 下，让血液凝固 1 到 2 小时（不加抗凝剂）；
2.4oC 冰箱过夜（让血块固缩）；
3.当血清自然析出后， 4oC，3000 转/分，离心 10 分钟，分离血清，弃去

第一次免疫用完全佐剂与免疫原混合，以后加强免疫用不完全佐剂与免疫原
混合，采取多点，时间间隔式免疫法

将 15-20cm 长的新生儿脐带放入无菌的 PBS 溶液中储存。（注：4℃下最多贮存 24 小时，室温下不超过 6 小时，否则废弃）

将对数生长的肿瘤细胞收集, 用无血清基质 10.0ml, 于 1500 转/分, 离心3min, 连续洗 3 次, 最后用无血清基质混匀, 用血球计数器计算肿瘤细胞数量(平均 5 个中方格的细胞计数×1000444即是肿瘤数/毫升)

细胞复苏与培养

确定抗生素作用的最佳浓度

该操作以 Invitrogen 公司的脂质体转染试剂 LipofectAMINE 为例，其它转染试剂可参照各自的使用说明书进行。

重组子可通过酶切进行鉴定，也可以利用扩增引物通过 PCR 进行鉴定，阳性重组子能切出所需要的片段或得到相应片段的 PCR 产物

取 100ul感受态细胞于冰浴上融化

挑取适当菌株的 E.coli 单菌落接种于 2ml SOB 培养液中，37℃摇床过夜

连接前先电泳确定待连接载体与片段的浓度

酶切前确定待切样品的浓度, 并选择合适的限制性内切酶和配套 Buffer