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神奇的分泌型荧光素酶(二),知否知否

发布者:艾美捷科技    发布时间:2019-12-17     
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【前情回顾】:神奇的荧光素酶(一),知否知否

 

荧光素酶

 

        作为报告基因,荧光蛋白(如绿色荧光蛋白(GFP)及其变体红色荧光蛋白(RFP)和黄色荧光蛋白(YFP)或者生物荧光素酶(如萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase,Fluc)海参荧光素酶(Renilla luciferase,Rluc))已成为研究基因调控、抗癌药物活性考察、基因突变分析、生物成像、DNA杂交分析及实时监测肿瘤发生发展情况等生物过程的潜在有效分析工具。但GFP等荧光蛋白的灵敏性相比于荧光素酶要低很多,而且GFP在细胞内容易累积,使其不适合实时监测。现有的生物荧光素酶中,Fluc发光时需要辅助因子ATP和Mg2+,Rluc虽然不依赖于ATP和Mg2+等辅助因子,但光子产量较低,另外Fluc和Rluc均不能分泌表达,监测酶活性时需要裂解细胞,操作繁琐且不能实现对实验现象的连续观察。

 

        近年,发现的一种来源于海洋桡脚类动物Gaussia princeps的Gaussia 分泌型荧光素酶是体内已知最小的可自然分泌的荧光素酶。因其可分泌、易于监测、灵敏度过、半衰期短、可进行活细胞或生物体实时监测等特性,在研究蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白定位、小干扰RNA(siRNA)沉默技术、肿瘤模型药物治疗评价、监测启动子活性、实时监测肿瘤发生发展情况和高通量药物筛选等中得到广泛应用。通过报告基因载体,Gaussia可用于哺乳动物细胞表达。表达后的Gaussia为单条肽链的单体酶,其分子较小(185aa),且具有分泌性信号肽,因此可通过内质网分泌到细胞外。该荧光素梅催化底物腔肠素的氧化反应并且发光(480nm),该反应无需ATP参与。

 

        与其他荧光素酶相比,使用Gaussia 作为报告基因有更多的优势:

        1. 分泌型荧光素酶,可直接取上清检测,无须裂解细胞;        2. 发光强度高,是其它荧光素酶的1千倍;        3. 反应无须ATP,不受ATP影响;        4. 稳定性高,对温度、PH值等耐受性强。

 

Gaussia 分泌型荧光素酶

 

        分泌型碱性磷酸酶(secreted alkaline phos-phatase,SEAP)是人胎盘碱性磷酸酶的突变体,最大特点是能由表达细胞分泌到细胞外,检测时可在不破坏细胞的情况下,任意时间点取细胞培养上清液进行重复、动态的检测,常作为荧光素酶检测过程中信号标准化的内参。

 

        GeneCopoeia 提供预制和定制的 GLuc-ON™ 启动子克隆,包括单报告基因载体系统和双报告基因载体系统。单报告基因载体系统以 Gluc 作为启动子的报告基因;双报告基因载体系统以 Gluc 作为启动子报告基因,以SEAP作为信号标准化的内参,可在活细胞中对超过 20,000 种人和 18,000 种小鼠启动子进行实时活性分析。

 

Gluc 启动子


分泌型碱性磷酸酶

 

 

分泌型双荧光素酶检测试剂盒

 

        Secrete-PairTM Dual Luminescence Assay Kit用于检测双报告系统中 Gluc 和SEAP的活性。Gluc 和SEAP都是分泌型蛋白,无需裂解细胞就能从培养基中获得实验样本。


货号 名称 规格 产品特性
LF031 Secrete-PairTM Dual Luminescence Assay Kit 100rxns 无需破碎细胞,吸取上清;检测Gluc 和SEAP酶活性
LF032 300rxns

 

分泌型单荧光素酶检测试剂盒


货号 名称 规格 产品特性
LF061 Secrete-PairTM Gaussia Luciferase Assay Kit 100rxns 无需破碎细胞,吸取上清;检测Gluc的酶活性
LF062 1000rxns

 

荧光素酶报告基因载体:


 

货号

产品


描述 规格
ZX101 pEZX-GN01 pEZX-GN01 包含Gluc和SEAP的报告载体 10µg
ZX102 pEZX-GN03 pEZX-GN03 包含Gluc和SEAP的报告载体 10µg
ZX103 pEZX-GA01 pEZX-GA01 包含Gluc和SEAP的报告载体 10µg
ZX104 pEZX-GA02 pEZX-GA02 包含Gluc和SEAP的报告载体 10µg
ZX105 pEZX-GA03 pEZX-GA03 包含Gluc和SEAP的报告载体 10µg
ZX106 pEZX-LvGN01 pEZX-LvGN01 包含Gluc和SEAP的报告载体 (lentiviral) 10µg
ZX107 pEZX-LvGA01 pEZX-LvGA01 包含Gluc和SEAP的报告载体 (lentiviral)

10µg

 


        GeneCopoeia致力于为国内生命科学工作者提供一流的产品和及时周到的服务,通过丰富的基因、蛋白、抗体、分析试剂盒等产品线,加速您的研究进程。作为GeneCopoeia在中国的区域一级代理,艾美捷科技有限公司将为中国客户提供最全面的GeneCopoeia产品以及客户订制化服务。

 

        作为GeneCopoeia在中国的区域总代理,艾美捷科技有限公司将为中国客户提供最全面的GeneCopoeia公司产品以及客户订制化服务。

 

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