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驱动蛋白(Kinesin)活性检测试剂盒

发布者:艾美捷科技    发布时间:2021-05-12     
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我们都知道,细胞是构成生物体的基本结构和功能单位,诚然作为生物体的基本结构和功能蛋白,细胞虽然很小,却五脏俱全,如果把细胞比作一个大型工厂,细胞核就是这个工厂的CPU,会在适当的时候给工厂中各个部门发送正确的指令,核糖体,内质网,线粒体,溶酶体等细胞器就是工厂内的职能部门,细胞骨架构成了这座大型工厂的外立面结果,以及内部错综复杂的运输通道,今天要给大家介绍的主角就是我们细胞工厂传送带上的一枚平凡却不普通的搬运工——驱动蛋白(Kinesin)。


Kinesin.png

定义


驱动蛋白是一类能利用ATP水解所释放的能量驱动自身及所携带的货物分子沿微管运动的马达蛋白,与细胞内物质运输有关。驱动蛋白的主动运动支持多种细胞功能,包括有丝分裂、减数分裂和细胞货物的运输,例如在轴突运输中。


结构及功能


驱动蛋白是一条长80nm的杆状结构,头部一端有两个成球状的马达结构域,另一端是重链((kinesin heavy chain,KHC)和轻链(kinesin light chain,KLC)组成的扇形尾端,中间是重链组成的杆状区。球状的头部具有ATP结合部位和微管结合部位。大多数驱动蛋白趋向于微管的正端,在大多数细胞中,这要求将货物(例如蛋白质和膜成分)从细胞中心向外围运输。这种运输方式称为顺行运输。


KHC.png


由于驱动蛋白在在细胞诸多物质运输过程中起着至关重要的作用,对不同状态下驱动蛋白活性检测也有了需求,驱动蛋白通过利用ATP水解的能量沿着微管(MT)上面移动而起作用。一旦驱动蛋白结合到它预定的MT轨道上,ATPase的作用效果通常会提高几百到几千倍。MT激活的驱动蛋白ATPase是其运动功能的主要参数,是监测和研究各种实验条件下驱动蛋白活性的有力方法。


今天给大家带来一款艾美捷的金牌合作商Cytoskeleton公司开发的Kinesin ELIPA?(酶联无机磷酸盐检测)试剂盒(货号:BK060)。这款试剂盒主要基于在无机磷酸盐(Pi)的存在时,在苯胺中嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)将2-氨基-6-巯基-7-甲基嘌呤核糖核苷(MESG)催化为2-氨基-6-巯基-7-甲基嘌呤时在330-360 nm处发生的吸光度变化来反映驱动蛋白活性。一分子无机磷酸盐将在不可逆的反应中生成一分子2-氨基-6-巯基-7-甲基嘌呤。


产品用途包括:


动力学测量微管激活的驱动蛋白ATPase的活性

驱动蛋白抑制剂的筛选现

驱动蛋白抑制剂IC50s的测定


试剂盒组分:


该试剂盒包含足够的材料,可进行96次测定。包括以下组件:

1.反应缓冲液

2.ELIPAreagent 1(MESG)

3.ELIPAreagent 1(PNP)

4.驱动蛋白重链结构域(货号:KR01)

5.预制微管蛋白(货号:MT002)

6.紫杉醇(货号:TXD01)

7.磷酸盐标准品

8.ELIPAreagent 1重悬缓冲液

9.ATP(货号:BSA04)

10.GTP(货号:BST06)

11.带有详细协议的手册和详尽的故障排除指南


检测结果:

Vmax.png


微管激活驱动蛋白重链ATP酶活性检测结果:检测了一些驱动蛋白ATP酶活性。ATP水解的Vmax范围从驱动蛋白HC的10,000 nmol ATP / min / mg到染色质激酶的470 nmol ATP / min / mg之间。


CENP-E(货号:CP01),Eg5的(货号:EG01)和Chromokinesin(货号: CR01


产品推荐:


产品名称货号
Kinesin ELIPA Kit BK060


引文赏析:


1.Serena, M et al. Molecular basis of MKLP2-dependent Aurora B transport from chromatin to the anaphase central spindle. J Cell Biol6 July 2020; 219 (7): e201910059. doi: https://doi.org/10.1083/jcb.201910059

2.Sheff, J. G. et al.Novel allosteric pathway of Eg5 regulation identified through multivariate statistical analysis of HX-MS ligand screening data. & Cell. Proteomics mcp.M116.064246 (2017) doi:10.1074/mcp.M116.064246.

3.Guido, B.C. et al.Impact of kinesin Eg5 inhibition by 3,4-dihydropyrimidin-2(1H)-one derivatives on various breast cancer cell features. BMC Cancer 15, 283 (2015). https://doi.org/10.1186/s12885-015-1274-1

4.Kadakkuzha, B. M. et al.High-Throughput Screening for Small Molecule Modulators of Motor Protein Kinesin. Assay Drug Dev. Technol. 12, 470–480 (2014).

5.Abnous, K., Barati, B., Mehri, S. et al.Synthesis and molecular modeling of six novel monastrol analogues: evaluation of cytotoxicity and kinesin inhibitory activity against HeLa cell line. DARU J Pharm Sci 21, 70 (2013). https://doi.org/10.1186/2008-2231-21-70

6.M. Larrayoz and A. Martinez. 2012. Proadrenomedullin N-terminal 20 peptide increases kinesin's velocity both in vitroand in vivo. Endocrinology. 153, 1734-1742.

7.J. Funk et al. 2004. Development of high-throughput screens for discovery of kinesin adenosine triphosphatase modulators. Anal. Biochem. 329, 68-76.


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