Poly (ADP-Ribose) ELISA检测试剂盒，超低样品需求量，微量裂解液即可完成PAR定量

产品概述

由艾美捷代理Cell Biolabs推出的Poly (ADP-Ribose) ELISA 检测试剂盒（货号：XDN-5114，96次测定）是一款采用夹心ELISA法对聚ADP-核糖（PAR）进行定量检测的试剂盒。PAR是由多个ADP-核糖基团连接而成的聚合物，作为真核细胞中重要的翻译后修饰，PAR化修饰能够调控靶蛋白的活性及其与其他蛋白的相互作用。该修饰由聚ADP-核糖聚合酶（PARPs）和ADP-核糖基转移酶2（ART2）催化，以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）为底物；其逆反应则由聚ADP-核糖糖水解酶（PARG）和ADP-核糖基水解酶3（ARH3）介导。

PAR化修饰参与癌变、细胞分化和细胞死亡等多种重要生物学过程。该修饰的异常调控与癌症、病毒感染及神经退行性疾病等病理过程密切相关。其中研究最为深入的功能是DNA损伤诱导的PAR链生成——PAR链可招募修复蛋白和染色质重塑因子，增强DNA修复能力；这一机制亦可能成为肿瘤逃逸凋亡的途径之一。近年来，多种PARP家族抑制剂在特定癌症治疗中展现出良好前景，目前已有三种药物在欧美获批上市，主要用于BRCA突变型卵巢癌的治疗。

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法进行PAR定量检测：

1. 抗PAR单克隆捕获抗体预先包被于微孔板

2. 样品或PAR标准品中的PAR与捕获抗体结合

3. 加入抗PAR多克隆检测抗体，与已捕获的PAR结合

4. 加入HRP标记的二抗，与检测抗体结合

5. 洗去未结合的酶标抗体，加入显色底物

6. 发生显色反应，颜色深度与样品中PAR含量成正比

7. 于450 nm处读取吸光度值

8. 参照PAR聚合物标准曲线计算样品中PAR含量

试剂盒组分

Box 1（室温运输）

96孔蛋白结合板（Part No. 231001）：96孔板

抗PAR包被抗体（Part No. 51146C）：20 uL

抗PAR检测抗体（Part No. 51142C）：15 uL

HRP标记二抗（1000×）（Part No. 51143C）：15 uL

检测稀释液（Part No. 310804）：50 mL

10×洗涤缓冲液（Part No. 310806）：100 mL

底物溶液（Part No. 310807）：12 mL

终止液（Part No. 310808）：12 mL

100×PARP抑制剂（Part No. 51145C）：3 mL，3-氨基苯甲酰胺（3-AB），100 mg/mL（735 mM），溶于DMSO

Box 2（冰袋运输）

PAR标准品（Part No. 51144D）：10 uL，2.5 uM

需自备材料

待测样品（细胞或组织裂解液）

酶标仪（可读取450 nm，可选620 nm作为参考波长）

RIPA裂解缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 7.6，150 mM NaCl，1% NP-40，1%脱氧胆酸钠，0.1% SDS，蛋白酶抑制剂或混合抑制剂）

SDS（十二烷基硫酸钠）

1×PBS

储存条件

收货后，PAR标准品请于-80°C保存；抗体于-20°C保存，建议分装以避免反复冻融。其余组分于4°C保存。

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*本试剂盒仅限研究使用，不可用于诊断目的。

文献参考

1. Miwa, M. and Masutani, M. (2017). PolyADP-ribosylation and cancer. Cancer Sci. 98(10):1528-35.

2. Lüscher, B. et al. (2018). ADP-Ribosylation, a Multifaceted Posttranslational ModificationInvolved in the Control of Cell Physiology in Health and Disease. Chem Rev. 118(3):1092-1136.

3. Martin-Hernandez, K. et al. (2017). Expanding functions of ADP-ribosylation in the maintenanceof genome integrity. Semin Cell Dev Biol. 63:92-101.