线性M1泛素链是泛素修饰中特殊的类型,泛素分子通过甲硫氨酸1(M1)氨基端首尾相连组装而成,区别于K48、K63等赖氨酸连接泛素链。M1线性泛素链在天然免疫信号通路、NFκB信号激活、细胞凋亡调控中扮演关键角色。但M1线性泛素修饰丰度低,同时受去泛素化酶(DUB)的动态剪切,样本制备过程极易发生修饰丢失,给内源M1泛素化蛋白分离检测带来很大阻碍。由艾美捷代理LifeSensors推出的Magnetic M1线性泛素TUBE(货号UM406M),针对M1线性多聚泛素链开发,为线性泛素研究提供高效Pulldown工具。
TUBEs(串联泛素结合元件)由串联UBA泛素结合结构域组成,相较于单个UBA结构域,对多聚泛素亲和力最高提升1000倍,达到纳摩尔级别,性能优于普通泛素抗体。
UM406M将M1特异性TUBE元件直接偶联磁性微球,实现一步法pull-down,不仅可以高效捕获M1线性泛素修饰蛋白,还能够在裂解、孵育过程中保护泛素链,抵御DUB与蛋白酶体降解,减少实验对抑制剂的完全依赖。该磁珠无需细胞过表达标签泛素,可直接从细胞、组织裂解物捕获内源M1线性泛素化底物,适配免疫印迹与泛素蛋白质组学研究。
规格
产品规格为1?mL磁珠悬液,实验起始参考用量为每1-2?mg总蛋白裂解液使用100?μL磁珠悬液;储存缓冲液为pH7.2 PBS,含0.05%叠氮化钠;需4℃保存,禁止冷冻、干燥、高速离心,防止磁珠结构破坏。强变性去垢剂如SDS、脱氧胆酸盐会降低捕获效率,裂解体系优先选用NP40等温和非离子去垢剂。实验可选择性搭配PR619广谱DUB抑制剂、1,10邻菲罗啉抑制JAMM家族金属DUB,进一步保护样本内泛素链完整性。
实验操作流程简洁便捷
使用前颠倒混匀磁珠,用TBST充分平衡洗涤磁珠;将平衡后的磁珠与预冷细胞裂解液4℃摇床孵育2小时;借助磁力架分离磁珠,收集流出组分,TBST多次洗涤去除非特异性结合蛋白;最后SDS上样缓冲液煮沸洗脱,即可进行SDSPAGE与WB检测,同时保留Input与未结合组分作为实验对照。磁珠体系依靠磁力完成分离,省去离心树脂沉降步骤,降低非特异背景,提升实验重复性。
线性M1泛素参与炎症、免疫应答等众多生命过程,但内源修饰丰度低,对样本前处理要求严苛。UM406M凭借M1链靶向识别、高亲和力、磁珠便捷操作、保护泛素链等优势,规避标签过表达带来的实验假象,助力研究者获取生理状态下真实的M1线性泛素修饰信息,是解析线性泛素介导信号网络的重要科研工具。该产品仅用于科研用途,不可用于人或动物诊断及治疗。

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