精准解析K63泛素化密码：LifeSensors K63 TUBE磁珠助力细胞信号与疾病机制研究

发布者：艾美捷科技发布时间：2025-07-01

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在蛋白质泛素化修饰研究中，K63连接的多泛素链因其独特的非降解性信号功能备受关注——它调控DNA修复、自噬、免疫信号传导等关键通路，却因细胞内丰度低、易被去泛素化酶（DUBs）水解而难以精准捕获。LifeSensors的UM404M K63 TUBE磁珠（货号：UM-0404M-1000）通过串联泛素结合实体（TUBEs）技术，实现了对K63链的高效富集，成为解锁复杂泛素网络的“金钥匙” 。

产品名称：UM404M K63 TUBE Magnetic Beads（LifeSensors）

核心功能：特异性富集K63连接的多聚泛素链，用于泛素化修饰研究

产品性能与技术优势

1. 超高亲和力与选择性：

纳摩尔级结合力：K63 TUBE磁珠通过串联泛素结合结构域（TUBE）设计，UM404M对K63链的解离常数（Kd）达~20 nM，比传统泛素抗体亲和力高100-1000倍，显著降低非特异性结合。这种特异性源于其优化的空间构象，可精准识别K63链独特的延伸构型。

100倍链类型选择性：对K63链的富集效率显著高于K48/K11等类型（选择性比>100:1），杜绝交叉反应。

2. 高效保护泛素化修饰：

传统免疫沉淀中，DUBs会水解不稳定的泛素链。UM404M的TUBE结构能在无抑制剂添加的条件下，阻断DUBs和蛋白酶体活性，防止样本中泛素链降解，确保修饰完整性。

3. 兼容低丰度样本：

仅需2 mg蛋白裂解液即可高效富集K63泛素化蛋白，适用于珍贵临床样本（如脑组织、原代细胞）。

已发表文献中的关键应用

1. DNA损伤修复与信号通路：

·K63泛素链是Rad6介导的DNA修复通路的必需信号。研究表明，UbK63R突变体会导致细胞对甲基磺酸甲酯（MMS）和UV敏感，证实K63链在基因组稳定性中的核心作用。

·应用案例：通过K63 TUBE富集，可研究DNA损伤后修复蛋白的泛素化动态。

2. 膜蛋白运输与内吞作用：

·K63链是多泡体（MVB）分选途径的特异性信号。酵母研究中，Gap1透膜蛋白和羧肽酶S（CPS）依赖K63泛素化进入MVB途径，而单泛素化仅介导内吞。

·应用案例：结合免疫荧光技术，可追踪K63泛素化对膜蛋白定位的影响（如GFP-CPS的液泡定位）。

3. 免疫信号与疾病机制：

·TBK1单倍剂量不足研究：通过K63 TUBE富集脑组织和成纤维细胞样本，发现TBK1突变导致K63泛素化谱改变，为神经退行性疾病提供新机制。

·JAK2激酶调控：在骨髓恶性肿瘤中，K63 TUBE捕获TPO刺激后JAK2的K63泛素化，揭示其通过非降解途径调控造血干细胞功能。

·Ataxin-3去泛素化酶靶点鉴定：在THP-1免疫细胞中，K63 TUBE筛选出Ataxin-3特异性作用的K63泛素化底物。

4. 氧化应激与蛋白酶体降解：

·过氧化氢（H2O2）刺激下，酵母内K63泛素链快速积累，调控翻译应激反应。

·突破性发现：K63链可作为“种子”触发K48/K63分支泛素链形成，驱动蛋白酶体降解（如TXN蛋白）。

操作流程简便高效

1. 样本处理：裂解液加入磁珠，4°C旋转孵育过夜。

2. 清洗与洗脱：TBS-T缓冲液清洗3次，避免污染物残留。

3. 下游分析：

·质谱（MS）：直接在磁珠上酶解，鉴定K63泛素化蛋白。

·Western Blot：配合K63链特异性抗体（如Anti-K63 Ubiquitin）验证。

为什么选择K63 TUBE磁珠？

·解决行业痛点：传统方法难以区分泛素链类型，且K63链丰度低、易被DUB降解。

·推动“泛素密码”解码：K63链在NF-kB激活、自噬、炎症反应中具有不可替代的功能。

·临床转化潜力：为癌症、神经疾病、免疫紊乱的靶向治疗提供分子标志物。

步骤	传统IP法痛点	UM404M解决方案
样本处理	需添加DUB抑制剂，改变生理状态	无需抑制剂，保持天然修饰环境
富集效率	低丰度靶标丢失率高	纳摩尔级亲和力，捕获限低至fmol级别
动态监测	难捕捉瞬时信号	成功解析H2O2刺激后5分钟的K63波动