OxiSelect 24孔彗星检测试剂盒：快速评估细胞DNA损伤

每天，每个细胞内的DNA都会因环境因素和正常代谢过程而发生1000至100万次分子损伤。虽然这一数字仅占人类基因组约60亿个碱基（30亿个碱基对）中的极小部分，但关键基因上未修复的损伤会阻碍细胞正常功能的发挥，并显著增加癌变风险。因此，准确、高效地检测DNA损伤对于基础研究和药物筛选具有重要意义。

彗星检测技术原理

彗星检测，又称单细胞凝胶电泳，是一种在单个细胞水平上测量DNA损伤的常用技术。在电场作用下，含有碎片和链断裂的受损DNA会与完整DNA分离，在显微镜下呈现经典的“彗星拖尾”形态。DNA损伤程度通常通过彗尾长度进行视觉评估，也可借助图像分析软件测量多种参数。

由艾美捷代理Cell Biolabs公司推出的OxiSelect 24孔彗星检测试剂盒（货号：STA-835）是一种快速、灵敏的检测方案，每套试剂盒可完成24次检测。其基本操作流程如下：

1. 将单个细胞与熔融琼脂糖混合后加样至24孔彗星检测专用玻片

2. 使用裂解缓冲液和碱性溶液处理包埋的细胞，使DNA松弛并变性

3. 在水平电泳槽中进行电泳，将完整DNA与损伤片段分离

4. 干燥后使用DNA染料染色，通过荧光显微镜观察

在上述条件下，含有断裂和链损伤的受损DNA比完整DNA迁移距离更长，形成典型的“彗星拖尾”形态。

试剂盒组分与储存条件

该试剂盒在室温下运输，各组分及储存要求如下：

组分名称 | 货号 | 规格 | 储存条件

24孔彗星检测玻片 | STA-836 | 1块 | 室温

彗星琼脂糖 | 235002 | 15 mL无菌瓶 | 室温

Vista Green DNA染料（10000×） | 235003 | 5 ?L管 | -20℃

EDTA溶液（500 mM） | 235004 | 50 mL瓶 | 室温

10×裂解液 | 235005 | 20 mL瓶 | 室温

用户自备材料

进行检测前，需准备以下材料：

NaCl粉末

NaOH颗粒

10 N NaOH（用于pH调节）

DMSO（可选）

70%乙醇

TE缓冲液（10 mM Tris，pH 7.5，1 mM EDTA）

PBS（不含Mg2+和Ca2+）及去离子水

EDTA（二钠盐）

操作要点提示

裂解液配制：使用前需将10×裂解液稀释至1×工作浓度，并加入NaCl粉末至终浓度。可根据实验需要添加DMSO。

电泳条件：碱性电泳条件下（33 V，300 mA，15分钟）可获得理想分离效果。以依托泊苷处理的Jurkat细胞为例，经20 ?M依托泊苷处理4小时后，可见明显的彗星拖尾形态，而未处理细胞则保持完整核形态。

染色观察：使用Vista Green DNA染料染色后，通过荧光显微镜观察。该染料具有高灵敏度，10000×浓缩液需按推荐比例稀释使用。

实验示例：

图1. 依托泊苷对Jurkat细胞的处理。在进行彗星实验（碱性电泳条件，33 V/300 mA，持续15分钟）前，Jurkat细胞未处理（左）或用20 ?M依托泊苷处理（右）4小时

如需高通量或其他特定应用场景，可参考以下同系列产品：

STA-321：DNA双链断裂染色试剂盒

STA-324：氧化性DNA损伤定量试剂盒（AP位点）

STA-350：彗星检测试剂盒（3孔玻片，15次检测）

STA-845：48孔彗星检测试剂盒（48孔玻片，48次检测）

STA-855：96孔彗星检测试剂盒（96孔玻片，96次检测）

文献参考：

1. Ostling, O., and Johanson, K. J. (1984). Micro gel electrophoretic study of radiation induced DNAdamages in individual mammalian cells. Biochem. Biophys. Res. Commun. 123, 291–298.

2. Singh, N. P., McCoy, M. T., Tice, R. R., and Schneider, E. L. (1988). A simple technique forquantification of low levels of DNA damage in individual cells. Exp. Cell. Res. 175, 184–191.

3. Olive, P. L., Banath, J. P., and Durand, R. E. (1990a). Heterogeneity in radiation induced DNAdamage and repair in tumor and normal cells using the "Comet" assay. Radiat. Res. 122, 86–94.4. De Boeck, M., Touil, N., De Visscher, G., Vande, P. A., and Kirsch-Volders, M. (2000). Validationand implementation of an internal standard in Comet assay. Mutat. Res. 469, 181–197.