OxiSelect彗星检测试剂盒，三孔高通量彗星分析玻片平台

一、产品概述与技术原理

由艾美捷代理Cell Biolabs推出的OxiSelect?彗星检测试剂盒（3孔玻片，货号STA-351，75次规格）是一款基于单细胞凝胶电泳（SCGE）技术的DNA损伤定量检测工具。该技术利用受损DNA与完整DNA在电泳场中迁移行为的差异——含有断裂和片段的损伤DNA会从细胞核中迁移出来，形成经典的“彗星尾”形态，而完整DNA则保留在核内。通过荧光显微镜观察并测量彗星尾长或尾矩等参数，即可评估单个细胞的DNA损伤程度。

人体细胞每天因环境因素和正常代谢产生约1000至100万处DNA损伤，尽管这仅占基因组约60亿个碱基的一小部分，但若关键基因损伤未能及时修复，将严重影响细胞功能并显著增加癌变风险。本试剂盒为研究者提供了一种快速、灵敏的DNA损伤评估手段，每套试剂可支持75次检测。

二、适用场景与核心优势

本试剂盒适用于以下典型研究场景：

1. 遗传毒理学评价：检测化学物、药物或环境污染物是否诱导DNA链断裂，是毒性筛查的常规方法之一

2. 氧化应激损伤评估：结合氧化应激模型，定量检测自由基攻击导致的DNA断裂水平

3. DNA修复能力研究：比较不同细胞株或处理条件下损伤后的修复动力学

4. 放射生物学研究：评估电离辐射诱导的DNA双链断裂及单链断裂

核心优势：

单细胞水平分辨率，可分析群体中异质性应答

3孔玻片设计，每张玻片可同时处理3个独立样本，提高通量

配套Vista Green DNA染料，荧光信号强且背景低

提供碱性电泳条件，可同时检测单链和双链断裂

三、操作流程与关键参数

核心步骤：

将待测细胞与熔融琼脂糖按比例混合，均匀铺制于OxiSelect彗星玻片上

待琼脂糖凝固后，依次进行裂解处理（去除细胞膜和蛋白质，释放核DNA）和碱性解旋（使DNA变性舒展）

在水平电泳槽中进行电泳，损伤DNA片段向正极迁移

电泳结束后，玻片经干燥、Vista Green DNA染料染色，于荧光显微镜下观察拍照

使用图像分析软件（需另购）测量尾长、尾矩、Olive尾矩等参数

关键质控点：

铺胶时琼脂糖温度需控制在约40°C，避免过热损伤细胞或过冷提前凝固

裂解液需新鲜配制并充分预冷（4°C），确保裂解效果

电泳条件（电压、时间）需根据细胞类型预实验优化，确保尾部分离清晰

全程避光操作，防止额外光致DNA损伤干扰结果

四、试剂盒组分与配套材料

提供组分（室温运输）：

OxiSelect 3孔彗星玻片25张（每张3孔，共75个检测位点）

彗星琼脂糖15 mL（无菌）

Vista Green DNA染料10000× 5 uL（需-20°C保存）

EDTA溶液500 mM 250 mL

裂解液（10×）100 mL

需自备材料（含关键试剂清单）：

NaCl粉末、NaOH颗粒、10 N NaOH（pH调节）

DMSO（可选添加，用于抑制额外自由基产生）

70%乙醇、TE缓冲液（10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA）

无Mg??/Ca??的PBS、EDTA（二钠盐）、去离子水

五、储存注意事项

收到试剂盒后，Vista Green DNA染料需立即转移至-20°C避光保存，长期保存建议分装避免反复冻融。其余组分（玻片、琼脂糖、裂解液、EDTA溶液）于室温保存即可。所有试剂使用前应恢复至室温（染料除外），裂解液工作液需现配现用并预冷。

六、关联产品推荐

为构建完整的DNA损伤研究体系，建议搭配以下试剂盒：

STA-320：氧化性DNA损伤ELISA试剂盒（8-OHdG定量，评估氧化碱基损伤）

STA-321：DNA双链断裂染色试剂盒

STA-324：氧化性DNA损伤定量试剂盒（AP位点检测）

STA-325：氧化性RNA损伤ELISA试剂盒（8-OHG定量）

STA-350：彗星检测试剂盒（3孔玻片，15次小规格，适合预实验）

文献参考

1. Ostling, O., and Johanson, K. J. (1984). Biochem. Biophys. Res. Commun. 123, 291–298.

2. Singh, N. P., McCoy, M. T., Tice, R. R., and Schneider, E. L. (1988). Exp. Cell. Res. 175, 184–191.

3. Olive, P. L., Banath, J. P., and Durand, R. E. (1990). Radiat. Res. 122, 86–94.

4. De Boeck, M., Touil, N., De Visscher, G., Vande, P. A., and Kirsch-Volders, M. (2000). Mutat.Res. 469, 181–197.