猪脑Arp2/3蛋白复合物，体外分支状肌动蛋白重构核心工具

产品概述

Arp2/3复合物（Actin-Related Proteins，肌动蛋白相关蛋白）是一种高度保守的七亚基蛋白组装体，负责启动分支状肌动蛋白丝的生长，在细胞运动、内吞作用及细胞内运输中发挥关键作用。该复合物被成核促进因子激活后，结合至现有肌动蛋白丝并诱导新分支成核，从而驱动肌动蛋白细胞骨架的动态重排。由艾美捷代理Cytoskeleton推出的猪脑Arp2/3蛋白复合物（货号RP01P）从猪脑组织中纯化获得，复合物由七个进化上保守的蛋白亚基组成，各亚基以近似等化学计量比存在，整体分子量约为224 kDa。产品以白色冻干粉形式提供。

应用场景

本品适用于Arp2/3功能的生化分析，以及肌动蛋白动力学体外调控研究。对于需要重构分支状肌动蛋白网络的实验体系，本品可作为核心成核因子使用。

纯度与组成

产品纯度通过4–20%聚丙烯酰胺凝胶考马斯蓝染色后的扫描光密度法评估，确定纯度大于90%。复溶至5 mg/ml时，缓冲液组成为20 mM Tris pH 7.5、25 mM KCl、1 mM MgCl?、0.5 mM EDTA、0.1 mM ATP、1.0%（v/v）葡聚糖及5%（v/v）蔗糖。

生物活性

本品生物活性通过其诱导体外肌动蛋白丝分支聚合的能力进行测定。在N-WASP的VCA结构域存在条件下，以1:200的摩尔比（Arp2/3:肌动蛋白）进行反应，Arp2/3复合物可增强肌动蛋白聚合3–5倍。聚合过程通过芘标记肌动蛋白的动力学荧光增强进行监测，激发波长360 nm，发射波长405 nm。该活性指标可直接用于评估复合物在体外重构体系中的功能表现。

背景信息

Arp2/3复合物是调控肌动蛋白细胞骨架的重要因子，存在于大多数真核细胞中。其两个亚基——肌动蛋白相关蛋白ARP2和ARP3——在结构上与单体肌动蛋白高度相似，可作为新肌动蛋白丝的成核位点。该复合物结合于现有“母”丝侧面，并以约70度夹角启动新“子”丝的生长。分支状肌动蛋白网络正是通过这种新丝成核过程形成的。Arp2/3复合物是分支状肌动蛋白丝成核的关键调控因子，对细胞运动、吞噬作用及细胞内运动至关重要。

储存与复溶

冻干产品应在4°C、干燥条件（湿度<10%）下保存，可稳定6个月。复溶时，使用10 ?l冰冷Milli-Q水将蛋白复合物重悬至5 mg/ml。复溶后复合物处于以下缓冲液中：20 mM Tris pH 7.5、25 mM KCl、1 mM MgCl?、0.5 mM EDTA、0.1 mM ATP、1.0%（v/v）葡聚糖及5%（v/v）蔗糖。随后应将蛋白分装至实验用量，用液氮速冻并储存于-70°C，可稳定6个月。

关键注意事项

应避免反复冻融。Arp2/3的进一步稀释应在以下缓冲液中进行：20 mM Tris pH 7.5、25 mM KCl、1 mM MgCl?及1 mM DTT。注意DTT须在使用前即时加入缓冲液，以保证其还原活性。遵循上述复溶与储存流程，可确保复合物在体外实验中保持稳定的成核活性与实验重复性。

文献参考

1. Pollard, T.D. et al. 2000. Ann. Rev. Biophys. Biomol. Struct.29: 545-576