Cas9 ELISA检测试剂盒，高灵敏RNP转染效率评估

产品概述

由艾美捷代理Cell Biolabs推出的Cas9 ELISA检测试剂盒（货号：PRB-5079）提供了一套简便的夹心酶联免疫方法，用于定量检测化脓性链球菌来源的Cas9蛋白。本试剂盒采用96孔板形式，通过特异性抗体捕获和检测，实现Cas9蛋白的精准定量。每套试剂盒可完成96次检测（含标准品、空白对照及待测样品），适用于基因编辑实验中Cas9表达水平的系统评估。

Cas9蛋白的生物学意义

Cas9（CRISPR相关蛋白9）是一种RNA引导的DNA核酸内切酶，与CRISPR适应性免疫系统相关联，广泛存在于包括化脓性链球菌在内的多种细菌中。Cas9能够解旋外源DNA（如质粒DNA或入侵噬菌体DNA），随后识别与引导RNA中20碱基对间隔区序列互补的靶位点。当DNA底物与引导RNA互补时，Cas9即切割入侵DNA。

近年来，Cas9蛋白作为基因组工程工具引发全球关注，能够在DNA上产生定点双链断裂。由此产生的DNA断裂可通过非同源末端连接使基因失活，或通过同源重组引入异源基因——这两种策略已在多种实验室模式生物中成功实现。由于Cas9几乎可以切割与其引导RNA序列互补的任何序列，CRISPR/Cas9系统在人细胞中的基因敲除和基因替换均已得到验证。因此，在基因编辑实验中准确定量Cas9蛋白表达水平，对于优化编辑效率、监控递送效果及评估脱靶风险具有重要意义。

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法：将抗Cas9捕获抗体预包被于96孔板，样品及标准品中的Cas9蛋白与捕获抗体结合；随后加入生物素标记的抗Cas9检测抗体，形成抗体-抗原-抗体夹心复合物；再以链霉亲和素-酶结合物催化底物显色。显色强度与样品中Cas9蛋白浓度成正比，通过与重组Cas9标准品比较实现定量。

试剂盒组分与储存

本试剂盒包含两个运输包装，收到后请按要求储存：

Box 1（室温运输）

抗Cas9抗体预包被板：96孔可拆卸板条

生物素化抗Cas9抗体（1000×）：10 uL

链霉亲和素-酶结合物：20 uL

检测稀释液：50 mL

10× 洗涤缓冲液：100 mL

底物溶液：12 mL（琥珀色瓶）

终止液：12 mL

Box 2（蓝冰运输）

Cas9标准品：50 uL，5 ug/mL（重组化脓性链球菌Cas9）

储存要求： Cas9标准品于-80℃分装保存，避免反复冻融；生物素化抗Cas9抗体于-20℃保存；其余组分于4℃保存。

需自备材料

细胞或组织裂解液（建议使用RIPA缓冲液制备）

含0.1% BSA的PBS

操作流程

1. 样品制备

细胞或组织样本以RIPA缓冲液裂解，离心取上清

使用含0.1% BSA的PBS稀释样品，建议进行预实验确定最佳稀释倍数

2. 标准曲线配制

以检测稀释液稀释Cas9标准品（5 ?g/mL），制备系列浓度梯度

建议浓度范围：0.01-5 ng/mL，每浓度设2个复孔

3. 孵育与洗涤

每孔加入100 ?L样品或标准品，室温孵育1-2小时

洗涤3-5次，每次300 uL 1×洗涤缓冲液

加入生物素化检测抗体，室温孵育1小时，洗涤

加入链霉亲和素-酶结合物，室温孵育30分钟，洗涤

4. 显色与终止

每孔加入100 uL底物溶液，室温避光孵育

待标准品孔出现明显颜色梯度后（通常5-20分钟），每孔加入100 uL终止液

以酶标仪读取450 nm吸光度

数据解读与质控建议

1. 标准曲线：每次实验重新配制标准品，确保R? ≥ 0.99

2. 样品稀释：若样品OD值超出标准曲线上限，需进一步稀释后重新检测

3. 回收率验证：建议在部分样品中添加已知量Cas9标准品进行加标回收实验，回收率应在80%-120%之间

4. 非特异性结合：以检测稀释液作为空白对照，用于扣除背景

应用场景

本试剂盒适用于：CRISPR/Cas9基因编辑实验中Cas9蛋白表达水平的定量检测；不同递送系统（质粒、mRNA、RNP复合物）递送效率的比较评估；Cas9融合蛋白的表达验证；以及基因编辑实验条件优化中Cas9蛋白量的标准化控制。配套的GFP和RFP定量及ELISA试剂盒可联合用于报告基因系统的全面评估。

文献参考

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