在表观遗传学研究领域,RNA修饰作为一种重要的调控机制日益受到关注。其中,N6-甲基腺嘌呤(m6A)作为真核生物中最常见的RNA修饰形式,在基因表达调控中发挥着关键作用。EpiQuik m6A RNA甲基化定量试剂盒(比色法)货号:P-9005为研究人员提供了一套完整的解决方案,能够快速、准确地定量分析各种生物来源的RNA中的m6A修饰水平。
Epigentek集团公司是创新技术和表观遗传学相关研究产品的开发商和供应商。公司开发了包括400多个专利产品的全面的产品组合,为表观遗传学方面的研究和新药研发提供全面系统的解决方案。各界备受推崇的学者、制药企业以及先进的生物技术公司都在使用Epigentek产品。相比普通方法的产品而言,这些独特的产品在科研分析过程中更简单、更快捷、更方便、更有效。
技术原理与创新特点
该试剂盒采用创新的比色法检测原理,基于ELISA-like的实验方案,通过特异性m6A抗体实现对RNA中m6A修饰的精准定量。其技术流程包括:首先利用特殊的高结合性结合溶液将大于70个核苷酸的RNA片段牢固地结合在微孔板上;随后使用特异性m6A捕获抗体和检测抗体进行识别反应;最后通过信号增强系统,在450nm波长下进行吸光度检测。整个检测过程仅需3小时45分钟即可完成,大大提高了实验效率。

在测定孔中加入了不同量的m6A标准对照浓度测定后采用EpiQuik? m6A RNA检测方法进行测量甲基化定量试剂盒(比色法)
试剂盒具有多项显著优势
1.高灵敏度:检测限可低至10pg m6A,能够检测样品中微量的m6A修饰;
2.广泛适用性:适用于从哺乳动物、植物、真菌、细菌到病毒等各种物种来源的RNA样品;
3.优质的特异性:经过优化的抗体和增强剂溶液确保了对m6A的高度特异性识别,在规定的RNA浓度范围内不与未甲基化腺苷发生交叉反应;
4.灵活的操作模式:条带式微孔板设计既适用于手动操作,也便于高通量分析;
5.完整的质控系统:提供通用的阳性和阴性对照,确保实验结果的可靠性。
m6A的生物学意义与研究价值
m6A修饰是真核生物中最丰富的RNA修饰形式,占所有RNA碱基甲基化的80%以上。这种动态可逆的化学修饰由甲基转移酶复合物METTL3催化形成,并可由新发现的m6A去甲基化酶FTO和ALKBH5以α-酮戊二酸和Fe2+依赖的方式去除。研究表明,这些酶在发育、代谢、生殖等多个生物学过程中发挥着重要作用。
m6A修饰主要分布在mRNA中,同时也存在于tRNA、rRNA和snRNA等非编码RNA中。这种修饰能够影响RNA的多个代谢过程,包括剪接、核输出、翻译能力和稳定性,以及RNA转录本身。m6A水平的异常变化与多种疾病密切相关,例如FTO突变患者中由于FTO活性增强导致的m6A水平异常降低,可能通过特定途径促进肥胖及相关疾病的发生。因此,m6A作为一种新型表观遗传标记,具有深远的生物学意义,对其水平和分布的研究将为疾病诊断和治疗提供重要信息。
实验操作与技术要求
实验所需的起始材料为从各种组织或细胞样本中分离的总RNA,包括培养细胞、新鲜或冷冻组织、石蜡包埋组织、血液和体液样本等。每个反应建议使用100-300ng RNA,最佳使用量为200ng,因为m6A的丰度通常低于总RNA的0.1%。
试剂盒的储存条件需要特别注意:组件分两部分运输,一部分在环境温度下,另一部分在4℃冰上运输。收到后,阴性对照、阳性对照、检测抗体和增强剂溶液需在-20℃避光保存;洗涤缓冲液、捕获抗体、检测溶液和8孔检测条带应在4℃避光保存;其余组分可在室温避光保存。所有组分在适当储存条件下可稳定保存6个月。
数据分析与结果解读
该试剂盒不仅能够定量m6A的绝对含量,还能比较不同RNA样品间的相对m6A甲基化状态。通过建立标准曲线(范围:0.02-1ng m6A)或使用单一浓度的m6A作为阳性对照,用户可以准确评估样品中的m6A水平。由于m6A含量可能因组织类型、疾病状态或处理条件的不同而存在差异,建议进行重复实验以确保信号的可靠性。
应用前景与发展潜力
随着表观转录组学研究的深入,m6A修饰在疾病发生发展中的作用机制日益明晰。该试剂盒的创新设计使其在基础研究和临床诊断领域都具有广阔的应用前景。在基础研究方面,它可以帮助科学家深入理解m6A修饰的生物学功能;在临床应用中,它可能成为疾病诊断的新型生物标志物检测工具。
特别值得一提的是,该试剂盒对非编码RNA中m6A修饰的检测能力,为研究ncRNA的调控机制提供了新的视角。此外,其高通量的特性使其特别适合药物筛选和疾病分子分型研究。
技术优势与市场定位
相比于传统的检测方法,EpiQuik? m6A RNA甲基化定量试剂盒在操作简便性、检测灵敏度和实验效率方面都具有明显优势。其独特的设计理念充分考虑了实际研究需求,既保证了检测的准确性,又提高了实验的通量。这种综合优势使其成为当前表观转录组学研究领域不可或缺的重要工具。
随着精准医疗时代的到来,对RNA修饰研究的需求将持续增长。该试剂盒的推出不仅满足了当前的研究需求,更为未来的科学发现和临床转化奠定了坚实的技术基础。其多物种适用性和稳定可靠的检测性能,使其在生命科学研究和医学研究领域都具有重要的应用价值。
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作为Epigentek 的独家代理,艾美捷科技为中国客户提供包括DNA甲基化研究工具、染色质结构分析、组蛋白甲基化研究、乙酰化与去乙酰化分析、DNA损伤与修补、组蛋白磷酸化、蛋白泛素化等系列研究试剂盒和抗体产品等全系列解决方案。
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