8-羟基鸟苷(8-OhG或8-oxoG)是鸟苷的氧化衍生物,由细胞RNA中的羟基自由基、单线态氧和单电子氧化剂生成。作为一种修饰的核苷酸碱基,8-OhG不仅因其含量丰富而重要,还因为它在RNA合成过程中发生的突变性错配可能会导致基因表达错误。8-OhG还通过影响染色质修饰参与基因激活/抑制的表观遗传调控。与细胞内通过碱基切除修复途径快速修复的氧化DNA不同,氧化RNA在氧化应激短暂冲击后可在细胞中停留数小时,RNA上的这些氧化标记可以被识别为细胞死亡的早期指标。研究表明,8-OhG水平的增加与暴露于有害环境因素(如电离辐射、工业化学品、空气污染、吸烟和癌症化疗)密切相关。此外,还已证实8-OhG浓度的增加与多种与年龄相关的疾病(包括癌症、冠心病、糖尿病和阿尔茨海默病等神经退行性疾病)在病理上有联系。与主要反映全身氧化损伤与修复速率平衡的尿液8-OhG检测相比,直接定量正常和疾病状态下不同细胞/组织中的8-OhG含量将能够识别RNA的组织特异性氧化损伤。因此,可以获得更有用的信息,以更好地理解氧化损伤与疾病之间的关系,这有助于疾病的诊断和治疗。
EpiQuik? 8-OhG RNA损伤定量检测试剂盒(比色法)是一套完整的优化缓冲液和试剂套装,用于直接检测从任何物种(如哺乳动物、植物、真菌、细菌和病毒)分离的RNA的氧化RNA损伤(8-OhG)状态,形式包括但不限于培养细胞、新鲜和冷冻组织、石蜡包埋组织和体液样本。
艾美捷Epigentek-EpiQuik 8-OhG RNA损伤定量直接试剂盒(比色法)(#P-6008-96)具有以下优势:
比色法检测,操作步骤简单方便,快速高效。整个过程可在3小时内完成。
高灵敏度,检测下限低至2皮克的8-OhG。
高特异性,仅在样本RNA的指示浓度范围内检测8-OhG。
直接检测完整的RNA中的8-OhG,消除了高分子化合物(如碳水化合物和蛋白质)的干扰,这些干扰在竞争性8-OhG检测中经常出现。
高度便捷的检测方法,直接使用从细胞或组织中分离的RNA,无需RNA消化或水解。
包含适用于任何物种的通用阳性和阴性对照,用于定量8-OhG。
条带式微孔板格式,适用于手动或高通量分析,使检测更加灵活。
检测条件简单、可靠且一致。
原理与操作:
该试剂盒包含用于定量氧化RNA损伤(8-OhG)所需的所有试剂。在该检测中,RNA被结合到经过特殊处理以具有高RNA亲和力的条带孔中。通过捕获和检测抗体检测8-OhG。检测到的信号被增强,然后通过在微孔板分光光度计中读取吸光度进行比色定量。8-OhG的量与测量的吸光度强度成正比。
左图:EpiQuik? 8-OhG RNA损伤定量检测试剂盒(比色法)示意图
右图:将不同浓度的8-OhG标准对照品加入检测孔中,然后使用EpiQuik? 8-OhG RNA损伤定量检测试剂盒(比色法)进行测量。
起始材料与输入量:
所需的输入材料是RNA,可以从各种组织或细胞样本中分离,例如培养瓶或微孔板中的细胞、新鲜和冷冻组织、石蜡包埋组织、血液、体液样本等。每次检测所需的RNA量为100纳克至300纳克。为了最佳定量,输入RNA量应为300纳克,因为基础8-OhG通常少于总RNA的0.01%。
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