Epigenase HDAC活性/抑制直接检测试剂盒，直接检测去乙酰化产物、告别胰蛋白酶干扰

一、背景介绍

核心组蛋白特定赖氨酸残基 ε-氨基的乙酰化是最稳健的表观遗传标记之一，对多种细胞过程的调控至关重要。组蛋白乙酰转移酶（HAT）催化的组蛋白乙酰化与基因组活跃区域相关，具有特别重要的意义；而组蛋白去乙酰化酶（HDAC）介导的去乙酰化则导致转录抑制。目前已鉴定出至少 4 类 HDAC：I 类包括 HDAC1、2、3、8；II 类包括 HDAC4、5、6、7、9、10；III 类即 sirtuins，依赖 NAD? 辅因子，包括 SIRT1 至 SIRT7；IV 类仅含 HDAC11，兼具 I 类和 II 类特征。

HDAC 紧密参与细胞周期调控、细胞增殖以及多种人类疾病的发生发展，包括癌症、心血管和肺部疾病以及神经性疾病。例如，多种肿瘤细胞中 HDAC 酶过表达；慢性阻塞性肺疾病（COPD）中 HDAC 降低；亨廷顿病中 HDAC4 发挥关键作用。检测 HDAC 的活性与抑制对于阐明基因激活与沉默的表观遗传调控机制具有重要意义，并有助于癌症诊断与治疗。

二、产品概述

由艾美捷代理Epigentek推出的Epigenase HDAC 活性/抑制直接检测试剂盒（货号：P-4035）是一套完整的优化缓冲液和试剂组合，用于荧光法检测核提取物或纯化 HDAC 同工酶（HDAC1-11）中总 HDAC 酶的活性或抑制作用。适用物种广泛，包括哺乳动物、植物、真菌和细菌，样本形式包括但不限于培养细胞、新鲜及冷冻组织。

该试剂盒在前代 EpiQuik HDAC 活性/抑制检测试剂盒基础上进一步优化，保留了简便、快速、高通量及无放射性等优点，同时具备以下优势：

背景极低：改进的试剂组成使背景信号极低，检测更准确、灵敏、可靠且一致。

直接检测：创新荧光法直接检测 HDAC 转化的去乙酰化产物，而非基于胰蛋白酶的肽段切割，从而消除 DMSO、含硫醇化学品、胰蛋白酶及细胞赖氨酰内肽酶造成的干扰。

体内外兼容：细胞/组织提取物和纯化 HDAC 酶均可使用，支持体内和体外检测 HDAC 抑制剂的抑制效果。

高灵敏：最低可检测 0.5 ng 纯化 HDAC 酶，灵敏度约为基于胰蛋白酶肽段切割法的 10 倍。

可定量：包含去乙酰化组蛋白标准品，可对 HDAC 比活性进行定量。

阳性对照：包含 Trichostatin A（TSA），一种 I 类和 II 类 HDAC 强效抑制剂，作为 HDAC 抑制的阳性对照。

灵活快速：条板微孔格式，手动或高通量分析均可在 3.5 小时内完成。

三、原理与操作流程

本试剂盒包含检测 HDAC 活性/抑制所需的全部试剂。实验中，乙酰化组蛋白 HDAC 底物被稳定包被于微孔板孔中，活性 HDAC 与底物结合并移除乙酰基。HDAC 去乙酰化产物可被特异性抗体识别。去乙酰化产物的比例或量与酶活性成正比，可在荧光微孔板读数仪上以 530ex/590em nm 读取荧光进行定量。HDAC 酶活性与所测荧光强度成正比。

四、文献参考

Kanojia A et. al. (August 2024). Interplay between DOT1L and HDAC1 regulates Leishmania donovani infection in human THP-1 cells. Acta Trop. :107352.

Xu Q et. al. (July 2022). ROS-stimulated protein lysine acetylation is required for crown root development in rice. J Adv Res.

Ageeva-Kieferle A et. al. (May 2021). Nitric oxide coordinates growth, development, and stress response via histone modification and gene expression. Plant Physiol.

Ageeva-Kieferle et. al. (June 2020). Nitric oxide coordinates histone acetylation and expression of genes involved in growth/development and stress response bioRxiv.

Zheng Y et. al. (April 2020). Histone Deacetylase HDA9 and WRKY53 Transcription Factor Are Mutual Antagonists in Regulation of Plant Stress Response. Mol Plant. 13(4):598-611.