Cell Biolabs 2-磷酸甘油酸检测试剂盒：基于荧光探针的2-PG高特异性检测

2-磷酸甘油酸（2-PG）是一种甘油酸，作为糖酵解这一代谢过程中的中间产物。磷酸甘油酸变位酶将3-磷酸甘油酸转化为2-PG，而烯醇化酶催化2-PG转化为磷酸烯醇式丙酮酸（PEP），这是葡萄糖转化为丙酮酸的倒数第二步。在细菌中，2-PG分子会共价结合到烯醇化酶上，导致该酶失活。磷酸甘油酸变位酶的过表达与多种人类癌症中的肿瘤生长、存活和侵袭有关。

Cell BioLabs的2-磷酸甘油酸检测试剂盒是一种简单的荧光法检测方法，可在96孔微孔板格式中测量生物样本中的2-PG含量。每个试剂盒提供足够的试剂进行多达100次检测（包括空白、2-PG标准品和未知样本）。通过与已知浓度的2-PG标准品进行比较，确定样本中的2-PG浓度。该试剂盒的检测灵敏度下限为3.1 ?M 2-PG。

注意：每个样本重复需要2次检测，一次用烯醇化酶处理（+E），一次不处理（-E）。2-PG的计算基于两个孔的相对荧光单位（RFU）读数差异。

作为Cell Biolabs全国总代理，艾美捷科技强烈推荐Cell Biolabs热销产品2-磷酸甘油酸检测试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

2-磷酸甘油酸检测试剂盒检测原理：

Cell BioLabs的2-磷酸甘油酸检测试剂盒用于测量生物样本中的总2-PG。2-PG在烯醇化酶的作用下被转化为磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）。在ADP存在的情况下，PEP通过丙酮酸激酶被转化为丙酮酸和ATP。丙酮酸在磷酸和氧气存在的情况下，通过丙酮酸氧化酶被转化为乙酰磷酸、二氧化碳和过氧化氢。生成的过氧化氢通过高特异性的荧光探针进行检测。辣根过氧化物酶催化探针与过氧化氢之间的反应，二者以1:1的比例结合。样本和标准品在96孔微孔板格式中进行比较，孵育60分钟后，使用标准96孔荧光板读数器读取结果。

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试剂盒组成  

盒子1（蓝色冰袋运输）  

1. 2-PG标准品（部件号51671C）：1管50 ?L，浓度为20 mM的2-磷酸甘油酸。  

2. 烯醇化酶（部件号51672D）：1管50 ?L，浓度为20 U/mL。  

3. ADP（部件号51624C）：1管250 ?L，浓度为200 mM的腺苷二磷酸。  

4. 荧光探针（部件号50231C）：1管50 ?L，溶于DMSO。  

5. 辣根过氧化物酶（HRP）（部件号234402-T）：1管10 ?L，浓度为100 U/mL，溶于甘油。  

6. FAD（部件号50293C）：1管50 ?L，浓度为2 mM的黄素腺嘌呤二核苷酸。  

7. TPP（部件号50294C）：1管50 ?L，浓度为2 mM的硫胺素焦磷酸。  

8. 丙酮酸氧化酶（部件号50295C）：1管300 ?L。  

9. 丙酮酸激酶（部件号51625D）：1管200 ?L。  

盒子2（蓝色冰袋运输）  

1. 10倍检测缓冲液（部件号51622A）：1瓶25 mL。  

2. 氯化镁（MgCl?）（部件号51623A）：1管200 ?L，浓度为1 M。

未提供材料  

1. 10 kDa分子量截留（MWCO）离心过滤器（例如Amicon Ultra 0.5 mL）  

2. 标准96孔黑色荧光微孔板和/或黑色细胞培养微孔板

储存条件  

收到试剂盒后，将10倍检测缓冲液和氯化镁在室温下保存。将丙酮酸激酶和烯醇化酶储存在-80℃。将其他所有组分储存在-20℃。荧光探针对光敏感，必须妥善保存。避免多次冻融循环。

结果示例  

下图显示了典型的2-磷酸甘油酸检测试剂盒结果。应该使用以下数据仅供参考。这些数据不应用于解释或计算实际样本结果。

文献参考：

1. Bo?l G Pichereau V Mijakovic I Mazé A Poncet S Gillet S Giard J-C Hartke A Auffray Y and Deutscher J (2004) J. Mol. Bio. 337:485-496

2. Votyakova TV, and Reynolds IJ (2001) J. Neurochem. 79:266-277.

3. Sharif F, Rasul A, Ashraf A, Hussain G, Younis T, Sarfraz I, Chaudhry MA, Bukhari SA, Ji XY,Selamoglu Z, and Ali M (2019) Int. U. Biochem. Mol. Biol. 71:1418-1427.

Cell Biolabs公司位于美国加利福尼亚州南部重要的工业城市圣迭戈（San Diego），是有名的细胞学试剂品牌，作为前沿的细胞学分析检测试剂盒生产商，为生物技术和研究类客户提供好的基于细胞功能研究以及疾病等方面的高端产品和技术服务。产品主要涵盖细胞研究、细胞信号通路和蛋白质生物学、代谢研究、病原体和毒素、干细胞研究等领域。全球众多大学、政府研究机构、生物、制药企业的科研实验室均在使用Cell Biolabs的产品。