IgE(猴)ELISA试剂盒：精准定量检测猴血清中的IgE

IgE是血清中含量最少的免疫球蛋白，通常含量约为100 ng/mL。它参与过敏反应，与嗜碱性粒细胞和肥大细胞上的Fc受体结合。抗原与IgE的后续结合会触发组胺和其他血管活性胺的释放。在哮喘、湿疹、鼻炎和寄生虫感染中，IgE水平会升高。

IgE（猴）ELISA试剂盒用于测量猕猴和食蟹猴血清中的IgE。该测定使用两种IgE单克隆抗体，一种用于固相固定（微孔板孔）。另一种与HRP结合，用于检测。

艾美捷IgE(猴)ELISA试剂盒：

货号：KA2450

校准范围：5至160 ng/mL

适用样本：血清

样本体积：100 ?L（稀释样本）

标记：HRP结合物

检测方法：比色法

监管状态：仅供研究使用（RUO）

反应性：猴

应用：定量

储存说明：将冻干标准品储存于-20℃。将所有其他组分储存于4℃。

仅供研究使用（RUO）

测定原理：

稀释的血清样本和标准品在微孔板孔中与HRP结合物一起孵育一小时。如果存在IgE分子，它们会被固定和检测抗体夹在中间。然后洗涤孔。加入TMB试剂并孵育20分钟。如果存在IgE，这将导致蓝色颜色的产生。通过加入终止液停止颜色发展，颜色变为黄色。在450 nm处测量吸光度。样本中IgE的浓度与吸光度成正比，并从标准曲线上得出。

试剂准备：

? 稀释液准备

提供的稀释液为10倍浓缩液。使用前，估计您的测定所需的最终稀释液体积，并将一份（1）体积的10倍浓缩液与九份（9）体积的蒸馏水或去离子水稀释。

? 洗涤液准备

提供的洗涤液为20倍浓缩液。使用前，将瓶中内容物（50 mL）与950 mL蒸馏水或去离子水稀释。

? 标准品准备

用1.0 mL蒸馏水或去离子水复溶IgE储备液（复溶后的储备液在4℃下稳定一天，但如需日后使用，应分装并冷冻于-20℃）。

标记6个聚丙烯或玻璃管，分别为160、80、40、20、10和5 ng/mL。

在标记为160 ng/mL的管中，加入IgE储备瓶标签上详细说明的稀释液体积。然后加入指示体积的IgE储备液并轻轻混合。这提供了160 ng/mL的标准品。

向标记为80、40、20、10和5 ng/mL的管中各加入250 μL稀释液。

通过将160 ng/mL标准品250 μL与标记为80 ng/mL的管中的250 μL稀释液混合稀释，制备80 ng/mL标准品。

同样通过两倍连续稀释法制备剩余的标准品。

样本准备：

我们发现猕猴和食蟹猴血清中IgE浓度范围从小于25 ng/mL到1000 ng/mL。最佳稀释度应通过实验确定，但我们建议初步以10倍稀释度测试样本。为避免基质效应，不要使用小于10倍（即5倍）的样本稀释度。

测定步骤：

在支架中固定所需数量的涂覆孔。

向孔中加入100 ?L HRP结合物。

向孔中加入100 ?L标准品和稀释样本（我们建议样本进行双份测试）。

在轨道式微孔板振荡器上以150 rpm和25℃孵育一小时。

吸出微孔板孔中的内容物，并使用平板洗涤器（400 ?L/孔）用1倍洗涤液洗涤孔5次。整个洗涤过程应尽快完成。

如有必要，将孔用力敲击在吸水纸或纸巾上以去除残留洗涤缓冲液。

向每个孔中加入100 ?L TMB试剂。

在室温（25℃）下，于轨道式微孔板振荡器上以100-150 rpm轻轻混合20分钟。

向每个孔中加入100 ?L终止液以停止反应。

轻轻混合。确保所有蓝色完全变为黄色非常重要。

在5分钟内用微孔板读数器在450 nm处测量吸光度。

标准曲线仅用于说明，不应用于计算未知量。每次进行测定时，应生成标准曲线。