FluoroSpot检测法在CAR-T细胞功能评估中的应用与潜力

发布者：艾美捷科技发布时间：2025-05-12

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CAR-T疗法的疗效可能会因T细胞耗竭而受到阻碍，从而导致效应功能降低。在最近的一项研究中，研究人员利用FluoroSpot检测法评估了CAR-T细胞的效力。该检测法能够在单细胞水平上检测各种细胞因子组合，从而间接评估特定CAR-T细胞产品中的T细胞耗竭水平。

CAR-T细胞治疗后复发的持续性对这些疗法提出了重大挑战。因此，迫切需要更好地了解CAR-T治疗部分疗效的机制，确定与持久反应相关的生物标志物或分泌谱，并相应地优化CAR-T产品的效力。除了考虑输注CAR-T细胞的表型和数量外，评估这些细胞在输注时的功能（分泌）属性至关重要。

使用CD19包被的磁珠刺激CAR-T细胞产品，以通过三色FluoroSpot评估最佳的分析物分泌谱

在利用FluoroSpot检测法评估CAR-T细胞的效力的研究中，Atanackovic等人利用FluoroSpot在单细胞水平上评估CAR-T细胞产品的功能动态，从而将数量评估与其功能特征相结合。在测试的细胞因子组合中，IFN-γ/颗粒酶B/TNF-α（货号FSP-013609-2， FluoroSpot Plus: Human IFNγ/Granzyme B/TNF-α）被证明是表征临床级CD19靶向CAR-T细胞产品最相关的组合。在检测中，Th2细胞因子如IL-4、IL-5和IL-10则明显稀缺。由于IFN-γ与抗肿瘤细胞毒性结果相关，传统上一直用于ELISpot检测法以评估肿瘤特异性T细胞反应。但在该研究中，细胞毒性颗粒酶B和促炎性TNF-α可以与IFN-γ结合用于评估CAR-T细胞的功能。这是因为与ELISpot不同，FluoroSpot能够评估多功能性，即同时分泌多种分析物的细胞。

以CD19包被的磁珠作为相关靶标、以重组BCMA包被的磁珠作为无关靶标或不加磁珠，对CD19靶向的CAR-T细胞进行刺激。以抗CD3/抗CD28抗体包被的磁珠作为阳性对照。采用FluoroSpot检测法检测IFN-γ、颗粒酶B和TNF-α的分泌情况，作为检测结果的读出指标。

使用FluoroSpot作为CAR-T产品评估效力检测法的四个方法学优势：

1. 基于抗原特异性T细胞在接触靶抗原后分泌细胞因子，而不是它们表达CAR，来定量这些细胞。

2. 该方法允许在单细胞水平上识别功能相关的CAR-T细胞。

3. 通过FluoroSpot检测到的T细胞的临床相关性进一步增加，因为它们是通过主动分泌效应细胞因子被检测到的，而不是像在细胞内细胞因子染色和流式细胞术中看到的那样仅仅是产生。

4. FluoroSpot检测法成本效益高，操作简单，稳健，而且可以在一夜之间完成，从而能够快速将产品提供给患者。

Mabtech作为FluoroSpot研究专家，可以提供多种FluoroSpot试剂盒，助力多细胞因子检测，是CAR-T细胞功能评估的重要工具：

货号	名称	用途
FSP-0102-2	FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-2	该FluoroSpot Plus试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IFN-γ和IL-2的细胞。
FSP-010209-2	FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-2/TNF-α	该FluoroSpot Plus试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IFN-γ、IL-2和TNF-α的细胞。
FSP-010209-TD-2	FluoroSpot Path: Human immune monitoring (3-color)	该FluoroSpot Path试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IFN-γ、IL-2和TNF-α的细胞，是疫苗研究、免疫疗法评估和传染病研究中监测免疫反应的完美解决方案。
FSP-010308-2	FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-17A/IL-5	该FluoroSpot Plus试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IFN-γ、IL-17A和IL-5的细胞。
FSP-0104-2	FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-13	该FluoroSpot Plus试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IFN-γ和IL-13的细胞。
FSP-0107-2	FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-10	该FluoroSpot Plus试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IFN-γ和IL-10的细胞。
FSP-010702-2	FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-10/IL-2	该FluoroSpot Plus试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IFN-γ、IL-10和IL-2的细胞。
FSP-010703-2	FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-10/IL-17A	该FluoroSpot Plus试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IFN-γ、IL-10和IL-17A的细胞。
FSP-010708-2	FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-10/IL-5	该FluoroSpot Plus试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IFN-γ、IL-10和IL-5的细胞。
FSP-010736-2	FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-10/Granzyme B	该FluoroSpot Plus试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IFN-γ、IL-10和颗粒酶B的细胞。
FSP-0108-2	FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-5	该FluoroSpot Plus试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IFN-γ和IL-5的细胞。
FSP-010809-2	FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-5/TNF-α	该FluoroSpot Plus试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IFN-γ、IL-5和TNF-α的细胞。
FSP-0109-2	FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/TNF-α	该FluoroSpot Plus试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IFN-γ和TNF-α的细胞。
FSP-0116-2	FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-4	该FluoroSpot Plus试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IFN-γ和IL-4的细胞。
FSP-011608-2	FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-4/IL-5	该FluoroSpot Plus试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IFN-γ、IL-4和IL-5的细胞。
FSP-011609-2	FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-4/TNF-α	该FluoroSpot Plus试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IFN-γ、IL-4和TNF-α的细胞。
FSP-011803-2	FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-22/IL-17A	该FluoroSpot Plus试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IFN-γ、IL-22和IL-17A的细胞。
FSP-0136-2	FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/Granzyme B	该FluoroSpot Plus试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IFN-γ和颗粒酶B的细胞。
FSP-013602-2	FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/Granzyme B/IL-2	该FluoroSpot Plus试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IFN-γ、颗粒酶B和IL-2的细胞。
FSP-013609-2	FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/Granzyme B/TNF-α	该FluoroSpot Plus试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IFN-γ、颗粒酶B和TNF-α的细胞。
FSP-013609-TD-2	FluoroSpot Path: Human immunotherapy potency (3-color)	该FluoroSpot Path试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IFN-γ、颗粒酶B和TNF-α的细胞。是细胞治疗产品效力检测和作用机制评估的正交方法。
FSP-121309-2	FluoroSpot Plus: Human IL-1β/IL-6/TNF-α	该FluoroSpot Plus试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IL-1β、IL-6和TNF-α的细胞。
FSP-13121509-2	FluoroSpot Plus: Human IL-6/IL-1β/GM-CSF/TNF-α	该FluoroSpot Plus试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IL-6、IL-1β、GM-CSF和TNF-α的细胞。
FSP-18010703-2	FluoroSpot Plus: Human IL-22/IFN-γ/IL-10/IL-17A	该FluoroSpot Plus试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IL-22、IFN-γ、IL-10和IL-17A的细胞。
FSP-18010803-2	FluoroSpot Plus: Human IL-22/IFN-γ/IL-5/IL-17A	该FluoroSpot Plus试剂盒旨在通过FluoroSpot检测法计数分泌人IL-22、IFN-γ、IL-5和IL-17A的细胞。