通过组蛋白后翻译修饰(PTMs)进行的表观遗传调控是基因表达控制的基石。这些修饰包括乙酰化、甲基化、磷酸化和泛素化,其动态和可逆的特性影响着细胞功能和生物过程。为了阐明组蛋白PTMs在健康和疾病中的深远意义,对其定量的稳健质量方法是不可或缺的。
组蛋白PTM定量是基础科学的重要组成部分,有助于揭示这些表观遗传标记在胚胎发育和组织分化等正常生理活动中的动态变化。研究这些修饰为理解例如指导谱系承诺和器官形成的调控机制,或表观遗传学在组织特异性基因表达程序中的作用提供了重要见解。在疾病研究中,定量组蛋白PTMs对于破译改变的表观遗传景观至关重要。这种方法通过识别与不同疾病亚型相关的特定修饰特征,为诊断策略做出了贡献。此外,理解疾病的表观遗传基础有助于识别潜在的治疗靶点,为个性化治疗策略铺平了道路。组蛋白PTM定量在药物发现工作中也发挥着关键作用,特别是在筛选调节这些表观遗传标记的小分子方面。识别影响组蛋白PTMs的化合物为癌症和神经性疾病等各种疾病提供了潜在的治疗途径。其应用还扩展到表观遗传靶向疗法的发展。
组蛋白PTM定量的方法有多种。染色质免疫沉淀(ChIP)是用于此目的的基础方法,采用选择性免疫沉淀策略。该技术包括将蛋白质与DNA交联,将染色质片段化,并使用特定抗体沉淀带有感兴趣修饰的组蛋白。交联逆转后,可以通过PCR或下一代测序分析富集的DNA。ChIP允许将组蛋白PTMs映射到特定的基因组位点,从而提供其空间分布的见解。质谱(MS)是识别和定量组蛋白PTMs的多功能替代方法。它涉及从细胞或组织中提取组蛋白,进行酶解,并通过质谱分析产生的肽段。MS允许同时分析多种组蛋白PTMs,提供表观遗传景观的全面概述。酶联免疫吸附测定(ELISA)为组蛋白PTM定量提供了一种高通量的手段,依赖于抗体与修饰组蛋白的特异性结合。在典型的ELISA中,将样品中的组蛋白固定在固相上,然后用特定抗体进行检测。ELISA特别适合于在各种生物样本中大规模筛选组蛋白PTM水平。
尽管取得了一定进展,但组蛋白PTM定量方法中仍存在一些影响结果准确性和可靠性的缺点。主要挑战之一是确保抗体的特异性和灵敏度。结果的准确性取决于抗体对感兴趣修饰的选择性。某些修饰的经验证抗体的可用性有限,需要持续进行抗体表征和验证工作。确保数据可重复性是组蛋白PTM定量中的另一个关键问题。标准化操作和分析流程对于减少实验室间差异并增强不同研究结果的可比性至关重要。实验程序中的背景噪声以及需要强大的归一化策略来考虑实验条件的变化也是重要的考虑因素。在动态细胞状态下实现精确定量,需要开发标准化的归一化实践。
为解决这些问题,表观遗传学专家EpigenTek设计了一系列高灵敏度、特异性、可靠且一致的组蛋白PTM定量试剂盒。通过组蛋白H3修饰多重分析试剂盒(货号P-3100)和组蛋白H4修饰多重分析试剂盒(货号P-3102),可以在同一个微孔板上,使用快速高效的类似ELISA方法,同时筛选和检测21种不同的组蛋白H3 PTMs或10种不同的组蛋白H4 PTMs,这些修饰包括所有最重要且经过充分表征的模式。这些创新的比色法测定具有高灵敏度和低检测阈值,并且无需电泳、色谱或昂贵设备。
货号 | ||
英文名称 | EpiQuik Histone H3 Modification Multiplex Assay Kit (Colorimetric) | EpiQuik Histone H4 Modification Multiplex Assay Kit (Colorimetric) |
中文名称 | 组蛋白H3修饰多重分析试剂盒 | 组蛋白H4修饰多重分析试剂盒 |
用途 | 同时检测21种不同的组蛋白H3修饰,包括H3K4me1,H3K4me2,H3K4me3,H3K9me1,H3K9me2,H3K9me3,H3K27me1,H3K27me2,H3K27me3,H3K36me1,H3K36me2,H3K36me3,H3K79me1,H3K79me2,H3K79me3,H3K9ac,H3K14ac,H3K56ac,H3ser10P,H3ser28P,H3K18ac,总H3 | 同时检测10种不同的组蛋白H4修饰,包括H4K5ac,H4K8ac,H4K12ac,H4K16ac,H4K20m1,H4K20m2,H4K20m3,H4R3m2a,H4R3m2s,H4ser1,总H4 |
数据 |
使用总组蛋白提取试剂盒(货号OP-0006)从MCF-7和MDA-231细胞中制备组蛋白提取物,使用组蛋白H3修饰多重检测试剂盒(货号P-3100)检测21组组蛋白H3修饰。 | 使用总组蛋白提取试剂盒(货号OP-0006)从MCF-7和MDA-231细胞中制备组蛋白提取物,使用组蛋白H4修饰多重检测试剂盒(货号P-3102)检测10种组蛋白H4修饰。 |
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