DNA甲基化整体水平定量检测大变革：ELISA如何颠覆传统方法？

DNA甲基化，特别是胞嘧啶残基在C-5位的甲基化（5-甲基胞嘧啶，或5-mC），在基因表达调控和各种细胞过程的调节中起着关键作用。表观遗传异常与人类疾病（包括癌症）有关。因此，定量分析DNA甲基化整体水平对于理解与生理和病理条件相关的表观遗传变化至关重要。目前，几种方法已在研究实验室中被广泛用于定量分析全球DNA甲基化，每种方法都有其独特的原理、优点和缺点。

高效液相色谱/质谱（HPLC/MS）

高效液相色谱结合质谱（HPLC/MS）被认为是定量分析修饰核苷酸碱基的“金标准”，因其高准确性、精确性和灵敏度，已被常规应用于DNA甲基化的定量分析。典型的HPLC/MS流程首先涉及核酸酶P1和碱性磷酸酶对分离DNA的消化。在消化后的DNA纯化后，脱氧核糖核苷通过C18柱的反相HPLC分离。随后，通过串联质谱获取脱氧核糖核苷的质量色谱图，并基于纯修饰脱氧核糖核苷标准品的标准曲线对目标修饰进行定量。尽管HPLC/MS具有高度定量和可重复性，但它需要昂贵的仪器设备、耗时的长流程、专业的技术专长和经过培训的人员。

亚硫酸氢盐转化

化学处理DNA是一种流行的选项，它能够特异性地针对甲基化和未甲基化的胞嘧啶残基，并且可以与下游的测序相结合，用于全基因组DNA甲基化的单碱基分辨率分析（全基因组亚硫酸氢盐测序）。对DNA进行亚硫酸氢盐处理，然后进行PCR扩增、克隆和测序，可以可靠地获取DNA胞嘧啶甲基化状态的信息。亚硫酸氢盐转化是一种化学反应，其中未甲基化的胞嘧啶被脱氨基为尿嘧啶，而5-mC保持不变。因此，甲基化和未甲基化的DNA胞嘧啶残基得以区分。然而，传统的转化方法需要较长的流程时间，这会导致严重的DNA降解、不适当的5-mC脱氨基以及低胞嘧啶转化率。

酶联免疫吸附测定（ELISA）

DNA甲基化酶联免疫吸附测定（ELISA）提供了一种简单、便捷且经济实惠的方法，用于快速评估特定甲基化DNA目标的全球水平，然后再考虑采用上述更深入且成本更高的方法。此类基于ELISA的方法使用抗体检测和定量DNA样本中的特定DNA甲基化修饰。这些测定通常涉及将DNA固定在固体表面（如微孔板）上，然后应用抗体进行检测。与传统ELISA在测定流程方面类似（例如，样本结合到测定孔、目标物被一抗捕获、通过酶偶联二抗进行信号检测），与传统ELISA相比，DNA甲基化ELISA极为灵敏，检测限更低，能够评估更广泛的样本类型。

无论是5-mC还是5-羟甲基胞嘧啶（5-hmC），DNA甲基化ELISA都是一种高通量、成本效益高的方法，用于分析各种修饰DNA形式。作为表观遗传学研究工具研发的先锋，EpigenTek利用其专有技术开发了快速、准确且被广泛引用的全球DNA甲基化定量免疫测定。全局DNA甲基化（5-mC）ELISA试剂盒（货号#P-1030）和全局DNA羟甲基化（5-hmC）ELISA试剂盒（货号#P-1032）专门设计为使用完整的输入DNA作为起始材料，消除了类似测定所需的额外样本处理（例如，变性、片段化）的需要。这些试剂盒结合了ELISA的便捷性和速度，以及高灵敏度、特异性、通用性、准确性和灵活性，使其成为研究全球DNA甲基化的研究人员的宝贵工具。